说明
Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase设计用于增强DNA 扩增的特异性、敏感性和产量(1-4)。使用该酶可在室温配制反应体系,使用非常方便。Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase 是一种化学修饰的重组Taq DNA polymerase,蛋白分子氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性,避免形成引物二聚体和非特异性延伸,从而增加DNA 扩增的特异性(见图1)。95°C加热4分钟可恢复酶活性。活化的酶具有与Taq DNA polymerase相同的功能:催化5’=>3’方向合成DNA、无可检测的3’=>5’校正外切酶活性、具有较低的5=>3’ 外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性,在PCR产物的3’-端多加1个腺嘌呤。活化前检测不到这些活性。
分子量
94 kDa,单体。
活性单位定义
1 个活性单位是指在74°C,30分钟内将10 nmol 脱氧核糖核苷酸合成掺入多聚核苷酸(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物:25 mM TAPS (pH 9.3, 25°C), 50 mM KCl, 2 mM MgCl2 , 0.2 mM各种dATP, dGTP, dTTP, 0.1 mM dCTP, 0.75 mM活化的鲑鱼精DNA, 0.4 MBq/ml 3 H]-dCTP。
保存缓冲液
保存缓冲液组分:
20 mM Tris-HCl (pH 9.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Tween 20, 0.5% (v/v) Nonidet P40和50% (v/v)甘油。
10X Hot Start PCR Buffer
200 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 200 mM KCl, 50 mM (NH4 )2 SO4 。
质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试:热启动PCR。
抑制与失活
- 抑制剂:阴离子去污剂(脱氧胆酸、肌氨酰和SDS的浓度分别高于0.06、0.02和0.01%时)(5)。
- 失活:酚/氯仿抽提。
图1。Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase催化特异性扩增2 kb片段。目标基因为人的beta-globine基因。
不同厂家的Taq DNA polymerases催化扩增( 35个循环)人的基因组DNA (50 ng)。目标基因为beta-globine, 扩增产物长度为2 kb。使用的热循环仪为GeneAmp® 9700 PCR仪。
M – GeneRuler™ 100 bp Plus DNA Ladder
1 – Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase, Fermentas
2 – Hot start Taq DNA Polymerase (化学修饰),厂家A
3 – Hot start Taq DNA Polymerase ( 温度依赖性抑制) , 厂家B