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Maxima® Hot Start DNA Polymer

ase
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  • ¥440
  • Thermo scientific -fermentas
  • EP0601
  • 2025年11月03日
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    • - 80°C加热20分钟不会使酶失活
    • - -20°C保存
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Hot Start PCR Buffer 25 mM MgCl2
    EP0601 100 u (5 u/µl) 0.60 ml 0.60 ml EP0601
    EP0602 500 u (5 u/µl) 2 x 1.25 ml 2 x 1.25 ml EP0602
    EP0603 5 x 500 u (5 u/µl) 10 x 1.25 ml 10 x 1.25 ml EP0603

    Features

    • 高产量扩增复杂模板。
    • 95°C加热4 分钟可激活酶活性。
    • PCR 特异性高 – 降低错配效应和减少引物二聚体的生成。
    • 增强的PCR敏感性。
    • 使用方便,室温配制PCR反应体系。
    • 扩增产物具有3’-dA突出末端。
    Applications

    • 热启动PCR。
    • 高产量扩增长达3 kb片段。
    • RT-PCR。
    说明
    Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase设计用于增强DNA 扩增的特异性、敏感性和产量(1-4)。使用该酶可在室温配制反应体系,使用非常方便。Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase 是一种化学修饰的重组Taq DNA polymerase,蛋白分子氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性,避免形成引物二聚体和非特异性延伸,从而增加DNA 扩增的特异性(见图1)。95°C加热4分钟可恢复酶活性。活化的酶具有与Taq DNA polymerase相同的功能:催化5’=>3’方向合成DNA、无可检测的3’=>5’校正外切酶活性、具有较低的5=>3’ 外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性,在PCR产物的3’-端多加1个腺嘌呤。活化前检测不到这些活性。

    分子量
    94 kDa,单体。

    活性单位定义
    1 个活性单位是指在74°C,30分钟内将10 nmol 脱氧核糖核苷酸合成掺入多聚核苷酸(吸附在DE-81上)所需的酶量。

    酶活性分析混合物:25 mM TAPS (pH 9.3, 25°C), 50 mM KCl, 2 mM MgCl2 , 0.2 mM各种dATP, dGTP, dTTP, 0.1 mM dCTP, 0.75 mM活化的鲑鱼精DNA, 0.4 MBq/ml 3 H]-dCTP。


    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    20 mM Tris-HCl (pH 9.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Tween 20, 0.5% (v/v) Nonidet P40和50% (v/v)甘油。

    10X Hot Start PCR Buffer
    200 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 200 mM KCl, 50 mM (NH4 )2 SO4

    质量控制
    相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试:热启动PCR。

    抑制与失活
    • 抑制剂:阴离子去污剂(脱氧胆酸、肌氨酰和SDS的浓度分别高于0.06、0.02和0.01%时)(5)。
    • 失活:酚/氯仿抽提。


    图1。Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase催化特异性扩增2 kb片段。目标基因为人的beta-globine基因。
    不同厂家的Taq DNA polymerases催化扩增( 35个循环)人的基因组DNA (50 ng)。目标基因为beta-globine, 扩增产物长度为2 kb。使用的热循环仪为GeneAmp® 9700 PCR仪。
    M – GeneRuler™ 100 bp Plus DNA Ladder
    1 – Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase, Fermentas
    2 – Hot start Taq DNA Polymerase (化学修饰),厂家A
    3 – Hot start Taq DNA Polymerase ( 温度依赖性抑制) , 厂家B

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