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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
充足
- 供应商:
天根生化科技(北京)
- 规格:
20μl×125次
产品简介
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂,可对目标DNA进行快速、特异性的定量检测。优化的预混液可缩短Real-Time PCR的反应时间,适用于标准或快速PCR仪。
FastFire qPCR PreMix采用了抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶,配合独特的快速PCR Buffer体系可确保在所有的Real-Time PCR仪上进行灵敏的qPCR反应,具有反应快速、PCR反应时间缩短60%,同时具有高扩增效率,高扩增特异性和宽广的可信范围的特点,使你在不影响PCR效果的前提下更快获得结果,节约科研时间和能源
产品特点
1. FastFire qPCR PreMix采用了抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶,配合特制的快PCR Buffer体系,可大大缩短变性、退火与延伸时间,可节省多达60%的反应时间,快速获得实验结果。
2. 本产品特制的快速PCR Buffer 体系含有独特的PCR稳定因子,在不损失PCR灵敏度和特异性的基础上进行快速反应,保证了FastFire qPCR PreMix高扩增效率,高扩增特异性和宽广的可信范围的特点。。
3. FastFire qPCR PreMix中预混有SYBR Green I,PCR反应液配制时,只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行快速Real-Time PCR反应,操作简单方便。
4. 本产品附带ROX Reference Dye,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。
储存条件
收到本产品后, 请立即置于-20 ℃ 避光保存。从-20 ℃ 取出使用时, 将冻存的FastFire qPCR PreMix和ROX Reference Dye融解,然后轻轻颠倒混匀,待溶液完全均一后再行使用。如解冻后没有使用,须彻底混匀后重新冷冻。(在解冻过程中盐会出现分层现象,未混匀进行冷冻,盐晶体的析出将会对酶造成损害)。如需一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。
注意事项
1.本产品中含有荧光染料SYBR Green I,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
2.如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。使用时请上下颠倒轻轻混匀,请不要使用振荡器进行混匀,尽量避免出现泡沫,并经瞬时离心后使用。
3.引物纯度对反应特异性影响很大,建议使用PAGE级别以上纯化的引物。
4.引物终浓度为0.3 μM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。如果需要进一步优化,可以在 0.2-0.5 μM范围内调整引物浓度。
5. 20 μl反应体系中,cDNA模板的使用量一般小于100 ng,基因组DNA模板量一般小于50 ng,逆转录产物作为模板时,使用量应不超过PCR体系终体积的20%。
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
几个复孔,选择重复性好的 CT 值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查:①加样准确度;②移液器吸取液体的准确度;③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样,减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系,并且增加模板的稀释梯度,大体积加样。如:原液 cDNA 添加 1μl,可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍,添加 5μl,使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法,最好在PCR扩增程序结束
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