真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒

真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途
真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒体，并呈现红色，用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种实验用真菌/酵母菌株线粒体的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。

技术背景

真菌/酵母细胞是一种低等单细胞真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单明了等原核生物的特点。作为模式生物，它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力，在分子遗传学方面认识最早，作为外源基因表达的细胞宿主。线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光探针MitoTracker RED，是一种含有硫醇（Thiol）氯甲基基团的荧光染料，自由通过细胞膜，选择性地聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色，在 580nm 波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体的线粒体。并可以分析线粒体膜电位，以检测线粒体活性。

产品内容

清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
预备液（Reagent C） 毫升
染色液（Reagent D） 微升
产品说明书 1 份

保存方式

保存 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月

用户自备

1.5 毫升离心管：用于真菌/酵母染色的容器载玻片：用于染色观察
微型台式离心机：用于沉淀真菌/酵母细胞培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 染色液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后分别移出xx 微升 预备液（Reagent C）和xx 微升 染色液（Reagent D）到新的 1.5 毫升离心管，标记为 染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

一、 活体染色

1. 准备好 1 毫升新鲜的酵母菌液（OD600＝1 至 2；1 X 10⁷细胞/毫升）
2. 移入到 1.5 毫升离心管
3. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
4. 小心抽掉上清液
5. 加入xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
6. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
7. 小心抽掉上清液
8. 重复实验步骤 5 至 7 一次
9. 加入xx 升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
10. 加入xx 微升含有 预备液（Reagent C）和 染色液（Reagent D）的 染色工作液，充分混匀（注意：参见注意事项 7）
11. 放进 20℃培养箱里孵育 20 分钟
12. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
13. 小心抽掉上清液
14. 加入xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
15. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
16. 小心抽掉上清液
17. 加入xx 微升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
18. 移出 5 微升到载玻片上，放上盖玻片
19. 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm（线粒体呈现红色） 二、 固定染色

1. 准备好 1 毫升新鲜的酵母菌液（OD600＝1 至 2；1 X 10⁷细胞/毫升）
2. 加入到 1.5 毫升离心管
3. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
4. 小心抽掉上清液
5. 加入xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
6. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
7. 小心抽掉上清液
8. 重复实验步骤 5 至 7 一次
9. 加入xx 毫升－20℃预冷的 固着液（Reagent A），混匀 10．放进－20℃冰箱里孵育 20 分钟

11. 加入xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
12. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）

13．小心抽掉上清液

14．重复实验步骤 11 至 13 二次
15．（选择步骤）置于 100 瓦超声仪下，功率 20％，猝击 5 秒一次（分离集聚一起的细胞）

16. 加入xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
17. 加入xx 微升含有 预备液（Reagent C）和 染色液（Reagent D）的 染色工作液，充分混匀（注意：参见注意事项 7）
18. 放进 20℃培养箱里孵育 20 分钟
19. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）

20．小心抽掉上清液

21. 加入xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
22. 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）

23．小心抽掉上清液

24. 加入xx 微升预冷的 清理液（Reagent A），混匀
25. 移出 5 微升到载玻片上，放上盖玻片
26. 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm（线粒体呈现红色）

注意事项

1. 本产品为 100 次操作
2. 操作时，须戴手套
3. 建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析
4. 孵育时，必须避免光照
5. 剩余的染色工作液可放进－20℃储存备用
6. 本产品适合活体染色和固定染色，染色剂不易洗掉，染色持久
7. 根据不同菌株类型，可以调整 染色工作液的使用剂量（1：100 至 1：1000 容量比），避免过度染色
8. 本公司提供系列线粒体分析试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。