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文献和实验shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子,如人源H1或鼠源U6启动子,pol III在哺乳动物细胞(绵羊是哺乳动物)内引导非编码小RNA的转录,转录产物无poly(A)尾,且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA); shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA,进而启动RNAi,介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。 是可行的! 高成胡君
U6 vector, nucleotide overhangs to the EcoR I and Apa I restriction sites are added to the 5' and 3' end of the DNA oligonucleotides, respectively (Figure 2). In contrast, for cloning into the pSilencer 2.0-U6, 2.1-U6, 3.0-H1, or 3.1-H1 vectors
a 9-nucleotide spacer (TTCAAGAGA), although other spacers can be designed. 5-6 T's are added to the 3' end of the oligonucleotide. In addition, for cloning into the pSilencer 1.0-U6 vector, nucleotide overhangs to the Eco R I and Apa I restriction sites
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