pcDNA3.1(+)载体

【求助】4 kb片段连接pcDNA3.1+的问题

wangch84 各位高手，兄弟最近忙于质粒构建，意图将一段长约4000 bp的片段，通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下： 1. 通过LA Taq酶扩增，并纯化回收目的片段（引物中带有酶切位点，保护性碱基＝3，上游带有Kozak序列）；由于回收效率很高，所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段，H2O 20 μl，10 X K BUFFER 4 μl，两种酶各2 μl，37℃作用过夜（12-14 h

常用载体元件介绍及病毒载体应用

1.常用载体分类：2,常用载体元件介绍：(1) 启动子：启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子；特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG，CMV，EF1a，PGK等，还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子；常用特异性启动子如成熟神经元特异性启动子hSyn，投射神经元特异性启动

文库合成的固相载体

恰当的选择固相载体和连接分子是固相反应的重要组成部分. 固相载体和连接分子都应该在多种遗传反应过程期间是保持稳定, 而且产品的切除应该是在温和的条件下实现. 本章将介绍各种不同的载体和连接分子. 如果反应后可以用过滤的方法去除, 从理论上讲, 任何材料都可用作固相载体. 聚乙烯, 聚苯乙烯-外涂聚乙烯薄层, 平滑的纸或棉花等都可以. 最常用的载体是: 聚苯乙烯(PS), 聚乙二醇(PEG), Tentagel (TG), 和PEGA (聚乙二醇-聚丙