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文献和实验。 GhVP 基因的亚细胞定位 将构建好的 pBI121-GhVP∷GFP 载体用金粉包裹,把金粉包裹好的质粒加入基因枪 GDS-80 轰击洋葱内表皮细胞, 在激光共聚焦显微镜下观察。可以看出,空载体 pBI121-GFP 转化洋葱表皮后, 在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光。pBI121-GhVP∷GFP 转化洋葱后,VP 蛋白定位于洋葱表皮细胞的细胞膜上,在玻片上加蔗糖,待质壁分离后,GhVP 蛋白在洋葱表皮细胞的细胞膜和细胞间质中均有分布(图3)。结果表明 GhVP 蛋白是 1 个跨膜蛋白, 与细胞
。引物序列如下:A :5' -CACGGGGGACTCTAGAATGGCTACATCAATGGCGAA-3' ;B :5' -AGGGACTGACCACCCGGGGGCGGCCCACCTCTGGGC-3' 。 (下划线所示序列为酶切识别位点) 七、用 Xba I 和 Sma I双酶切 PCR 扩增产物,得到 GAPDH 基因片段;用 Xba I 和 Sma I双酶切受体载体 pBI121,得到载体大片段;将基因片段与载体大片段连接,得到重组质粒 pBI121-GAPDH 。八、将重组
from in vitro seedlings are used as starting materials. The explants are inoculated and cocultivated with a disarmed, binary strain of A. tumefaciens CIB542 harboring a mini Ti plasmid, pBI121. A modified Gamborg’s B5 medium is used as the basal culture medium
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