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文献和实验在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验,所以我这里写的T载体构建只能算是入门级,给新手提供一点思路,有什么不足之处还希望大家多多指正。 我克隆的这个片段大小是1.8kb,用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。 反应体系:5*buffer 5 ul MgCl2 5 ul dNTPs 8 ul Primer 1 1 ul Primer 2 1 ul LA-Taq 0.5 ul cDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA) ddH2O up to 50 ul
网上有两种pGEX-KG序列,请各位准备使用该质粒的朋友们注意啊! >SEQ1 >Addgene_VectorDB_5100 pGEX-KG 5006 base pairs acgttatcgactgcacggtgcaccaatgcttctggcgtcaggcagccatcggaagctgtggtatggctgtgcaggtcgta
Making the T-vector: 1.Digest 5 ug of vector DNA ( pBluescript & pUC18) with a restriction enzyme that generates a unique blunt end site, for example EcoRV or Sma I ( we prefere EcorV for it's stable activity at 37 C) for 2 hours at 37 C. 2.Run
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