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文献和实验2.IL-3的分子结构和基因 1984年美国和澳大利亚分别从ConA刺激小鼠T细胞和WEHI-3B细胞中提取高活性部分mRNA,逆转录成cDNA,进行克隆化和DNA序列分析。编码小鼠IL-3和GM-CSF的基因都定位于第11号染色体。IL-3的 基因组 由5个外显子和4个内含子组成。cDNA编码166氨基酸残基,N端26氨基酸残基为信号肽,此外N端另有数个氨基酸残基可能被血清蛋白酶所切除。成熟小鼠IL-3由131氨基酸残基组成,含有糖基,分子量为25~28kDa
球蛋白,常用的指示细胞有分泌IgG的ARH-77、CESS和分泌IgM的SKW6.CL-4。在一定的条件下,待检样品中IL-6水平与培养细胞上清IgG或IgM水平正相关,通过标准IL-6的对照可推算出待检样品中IL-6的活性。 表4-22 细胞因子生物学活性检测方法(举例) 被检细胞因子 实验系统 可干扰的因素 IL-1 D.10(小鼠T细胞) 增殖法(3H-TdR、MTT) 人IL-2;小鼠IL-2、IL-4、IL-7、GM-CSF、TNF等 小鼠胸腺细胞 增殖法
(一)细胞增殖法 IL-2可刺激某些淋巴细胞增殖,根据细胞增殖情况可反映IL-2的活性,结果以U/ml表示。目前所用的IL-2反应细胞主要有CTLL、CTB6、F12、CTLL-2等小鼠IL-2依赖细胞株以及ConA活化的小鼠淋巴母细胞和小鼠胸腺细胞。这类细胞的增殖情况均可通过显微镜下直接计数、3H-TdR掺入法以及MTT法加以测定。 1.依赖性细胞株增殖法IL-2依赖细胞株在IL-2存在时才能生长,而对PHA、ConA等促有丝分裂原及IL-2以外的其它细胞因子均无反应
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