DAB 3,3二氨基联苯胺四盐酸二水

细胞色素氧化酶二氨基联苯胺显示法（DAB法）

化酶活性。 3，3， ―二氨基联苯胺(3，3， ―diaminobenzidine，DAB)在细胞色素氧化酶的催化下，其侧链氨基被氧化，并进行反复氧化性聚合和氧化性环化，形成不溶性褐色吩嗪(phenazine)聚合体，DAB将氧化型细胞色素C还原，还原型细胞色素C又被细胞色素a再氧化。通过该循环的反复进行，DAB不断被氧化，反应氧化物沉积。DAB氧化物含有活性游离基，该游离基能使四氧化锇还原形成锇黑，故可在电镜下观察。 (1)孵育液配制 蒸馏水 5ml

免疫组织化学（HRP-DAB系统）

化物酶，然后用PBS洗涤三次，每次 5min。4 ） 加入一抗（用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗），37℃湿盒孵育1h。5 ） 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次，每次5min。6 ） 加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标二抗，室温下湿盒孵育30min。7 ） 用PBS洗涤玻片5次，每次5min。8 ） 按照DAB试剂盒说明添加显色液，避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。9 ） 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。10

免疫组化实验DAB显色时间如何把握？

（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗； （2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间； （3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间； （4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现