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北京鼎国昌盛
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文献和实验台上将细胞以25-30μL的量,分装到1.5Ep管中,每管细胞加3-5μL连接液,冰浴30min,这里说明一下,买的感受态细胞的包装量一般都是100μL一管,实验室为了节约成本,经过实际验证,发现25-30μL的细胞,就足够一次克隆所需,所以在事先要安排好一次克隆的样品量,一般情况下都是3-4个样品1管细胞的预算安排。 在细胞冰浴的时候,打开水浴锅,温度设置为42℃,冰浴结束后,需要42℃热激90s(时间要准确,用秒表计时),之后冰浴1min。注意:热激时最好将Ep管插在浮板中,尽量使Ep管不要晃动
0.28g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。 6.含15%甘油的0.05mol/L CaCl2: 称取0.28g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。第三节 操作步骤 一、 受体菌的培养 从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB
Chromatogr B 786 (2003) 305-309. 36. J. Xu, Q. Zhou, Z. Ma, J. Yu, M. Hua, R. Ding, Study on construction of His6-human TNF¦Â fusion expression plasmid and single-step purification of its product, Pharmaceutical Biotechnol. 7 (2000) 1-5. 37. L. Guo
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