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- KALANG/进口品牌
- 中国/美国
- KL421Hu03
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Fibulin 4 (FBLN4)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验Nature 子刊：中国团队在扇贝足丝蛋白仿生材料研究领域取得重要研究进展
327 ± 32%(图 1a)，超过了绝大多数天然的生物纤维（图 1b）。通过对足丝纤维部 (图 1c) 微观结构进行观察，足丝纤维由折叠的片层组成，并且富含 β-sheet 结构 (图 1d)。基于多组学技术从足丝纤维部筛选出关键蛋白组分 Sbp5-2（图 1e）, 该蛋白具有显著的序列特点：含有多个重复模块（TRM）并且富含 Cys（图 1f）。体外重组表达该蛋白的重复模块序列成功制备了仿扇贝足丝的重组蛋白纤维（图 1 g-j）。 图 1. 扇贝足丝机械性能与结构以及重组蛋白纤维制备 体外
「铲屎官」注意了！剑桥大学揭示这些基因的改变或让猫猫狗狗成为
细胞 iBMDM 和犬的巨噬样细胞 DH82。结果表明小鼠巨噬细胞感染 2 小时后开始裂解，而犬的巨噬样细胞经过 12 小时仍存活，表明犬的细胞对于鼠伤寒沙门菌的耐受性更高。接着，研究者在小鼠模型上通过 CRISPR-Cas9 技术构建了与 caspase-1/-4 融合蛋白催化作用相当的重组蛋白。小鼠细胞在脂多糖（LPS）刺激下很快裂解，而犬的巨噬样细胞对于 LPS 的刺激则无反应。进一步的体外实验表明，caspase-1/-4 融合蛋白能激活 IL-1β 并且同时切割消皮素 D。图片来源：Cell
功能的生物材料配制细胞培养基，如牛血清白蛋白（BSA）、转铁蛋白、胰岛素等生物大分子物质，以及从血清中提取的去除蛋白质的混合脂类以及水解蛋白等。其特点是培养基中的蛋白含量较高，添加物质的化学成分不明确，其中含有大量的动物来源蛋白。 2. 无动物来源培养基：许多无动物来源培养基是基于生产重组药物安全的考虑，培养基中的添加组分无动物来源，需要的蛋白来源于重组蛋白或者蛋白水解物，这些组分可以保障细胞生长及增殖的需要。 3. 无动物蛋白培养
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