- ￥3700
- Genloci
- GP0131
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20 ℃
- 规格：
4 μg
❀ 产品描述
pGK1.0 是一种高效、精准的基因编辑载体，它是基于人工核酸内切酶 CRISPR/Cas9 而研发的，相对于传统敲除技术和 TALEN、ZFN 技术而言，其操作更加简便，敲除效率最高，基因的编辑更加的精准， 大大降低了脱靶机率。该载体能够适用于几乎所有哺乳动物细胞的基因修饰研究。
pGK1.0 载体包含 Cas9 核酸酶表达框和 Guide RNA (gRNA)克隆框，gRNA 克隆框能够快速高效的克隆编码靶标特异的CRISPR RNA (crRNA)的 DNA 片段。让您仅靠单个载体就可以轻松地完成基因组 DNA 的编辑， 实现精准、低 off-target 的基因编辑体验！
※注：pGK1.0在原核中是呈现卡那霉素抗性的，卡那霉素抗性基因编码的是新霉素磷酸转移酶II,基因记做 Neo,能通过降解G418、新霉素和卡那霉素来实现真核和原核细胞的相应抗性，所以其既可以在原核生物中表达使大肠杆菌等表现出卡那霉素抗性，也可以在真核生物中表达使动植物细胞表现出 G418 抗性。
❀ 产品优势
● 精准的修饰：Cas9 蛋白无特异性，降低脱靶效应，实现精准的基因编辑；
● 敲除效率高：较传统技术和 TALEN、ZFN 技术，敲除效率最高；CRISPR/Cas9 系统的两大功能组件于一个载体上，转染效率更高；
● 操作简便：编码 sgRNA 的 DNA 片段小于100 bp，这些使操作更加简便。
❀ 保存
-20 ℃
❀ 注意事项
因为 Cas9 蛋白比较大，就导致整个敲除质粒较大（9kb 左右），如此大的质粒很容易导致转化效率低下， 尤其是使用脂质体等化学试剂转染时，转染效率会比较低些。所以，我们推荐使用电转的方法进行转染。 吉锐生物的 Celetrix 细胞电转仪（型号 CTX-1500A；Cat. No. GP7901,GP7902），转化效率高，可适用于难转染的细胞系。
Cat. No. 产品名称 规格 GP0131 pGK1.0 (Neo) 4 μg
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文献和实验技术，使用CRISPR/Cas9技术做基因敲除是效率最高，成本最低的技术。其中的关键因素无异于下面几点：1) 明确需要敲除的基因序列 首先需要明确内含子和外显子序列；可以登录NCBI或者UCSC的网站可以方便的查到；2) 合适的靶位点选择 一般建议设计2-3条，然后转染到细胞中，用Cruiser™ 和测序的方法验证哪个靶位点的活性最好；也可以登录经过体内活性验证的CRISPR/Cas9敲除载体库，根据自己所要研究的基因选择相关载体。如若没有，可以定制（可见本文章来源）；3) 敲除载体选择 根据需要
( nonhomologous end-joining) 修复重新连接 DNA，造成靶点附近 DNA 序列缺失突变。 Cas9 切割原理: 2、pTYNE 载体靶点验证原理：将包括靶点在内的大约 200bp 基因组序列克隆到 pTYNE 载体。构建好的 pTYNE 载体与 pCas9/gRNA1 基因敲除载体共转染 293T 细胞。如果靶点有效，基因敲除载体对 pTYNE 载体载体切割，经过细胞修复后 pTYNE 上移码突变的 EGFP 基因得到修复，发出绿色荧光。 3、阳性细胞筛选原理
三句话读懂一篇 CNS，酗酒背后的机制，环境-基因互作诱导肿瘤发生，Cas9 时钟...
事件和时间 2021 年 2 月 3 日，韩国延世大学 Hyongbum Henry Kim 教授团队在 Cell 上发表研究论文 Recording of elapsed time and temporal information about biological events using Cas9。该工作在哺乳动物细胞引入 CRISPR-Cas 系统，其产生的插入缺失等突变以稳定的速率累积。CRISPR-Cas 系统利用上述特点热刺激激活、结合药物激活和炎症反应激活，能够记录药物的累积时间，同时确定
