- ￥4370
- Genloci
- GP0128
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20 ℃
- 规格：
4 μg
❀ 产品描述
pGK2.1 是一种高效、精准的基因编辑载体，它是基于人工核酸内切酶 CRISPR/Cas9 而研发的，相对于传统敲除技术和 TALENs、ZFNs 技术而言，其操作更加简便，敲除效率最高，基因的编辑更加的精准， 大大降低了脱靶机率。该载体能够适用于几乎所有哺乳动物细胞的基因修饰研究。
pGK2.1 载体包含 Cas9 核酸酶表达框和 Guide RNA (gRNA) 克隆框，gRNA 克隆框能够快速高效的克隆编 码靶标特异的CRISPR RNA (crRNA)的 DNA 片段。该载体含有两个敲除插入位点，可以实现基因片段的敲除，另外，它还含有 Puror 的筛选标记，让您仅靠单个载体就可以轻松地完成基因组 DNA 的编辑，实现精准、低 off-target 的基因编辑体验。
※注：pGK2.1 在原核中是呈现卡那霉素抗性的，卡那霉素抗性基因编码的是新霉素磷酸转移酶II,基因记做 Neo ,能通过降解G418、新霉素和卡那霉素来实现真核和原核细胞的相应抗性，所以其既可以在原核生物中表达使大肠杆菌等表现出卡那霉素抗性，也可以再真核生物中表达使动植物细胞表现出 G418 抗性。
❀ 产品优势
● 精准的修饰：Cas9 蛋白无特异性，降低脱靶效应，实现精准的基因编辑；
● 敲除效率高：较传统技术和 TALENs、ZFNs 技术，敲除效率最高；CRISPR/Cas9 系统的两大功能组件于一 个载体上，转染效率更高；
● 双敲除：具有两个启动 gRNA 的启动子，两个敲除插入位点，可以实现基因片段的敲除；
● 操作简便：编码 sgRNA 的 DNA 片段小于 100 bp，这些使操作更加简便。
❀ 保存
-20 ℃
❀ 注意事项
因为 Cas9 蛋白比较大，就导致整个敲除质粒较大（10 kb左右），如此大的质粒很容易导致转化效率低下， 尤其是使用脂质体等化学试剂转染时，转染效率会比较低些。所以，我们推荐使用电转的方法进行转染。 Genloci 的 Celetrix 细胞电转仪（型号 CTX-1500A；Cat. No. GP7901,GP7902），转化效率高，可适用于难转染的细胞系。
| Cat. No. | 产品名称 | 规格 |
| GP0128 | pGK2.1 (Puro) | 4 μg |
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文献和实验技术似乎具有无限的潜在用途，可以在无数方面造福人类。可靠、准确的基因编辑可以彻底改变人们对生育决定的看法，也可以改变人们对与特定疾病或疾病相关的基因突变检测呈阳性的事实。鉴于此，这些发展对在基因咨询等领域为公众工作和提供咨询的专业人士意味着什么？我采访了陈莎伦（音译，CGC），她是诺思韦尔医学遗传学和基因组学健康部的遗传顾问。当被问到CRISPR-Cas9和基因编辑技术时，她说她相信这项技术会一直存在，最大的问题是：这项技术将如何使用，潜在的副作用是什么？对于基因咨询师来说，广泛接触CRISPR
( nonhomologous end-joining) 修复重新连接 DNA，造成靶点附近 DNA 序列缺失突变。 Cas9 切割原理: 2、pTYNE 载体靶点验证原理：将包括靶点在内的大约 200bp 基因组序列克隆到 pTYNE 载体。构建好的 pTYNE 载体与 pCas9/gRNA1 基因敲除载体共转染 293T 细胞。如果靶点有效，基因敲除载体对 pTYNE 载体载体切割，经过细胞修复后 pTYNE 上移码突变的 EGFP 基因得到修复，发出绿色荧光。 3、阳性细胞筛选原理
CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具，可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA（guide RNA， gRNA）和 Cas9 蛋白的参与下，待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA，被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct，如需直接复制网址，可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点：基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率
