- ￥1280 - 3980
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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Serum Amyloid A2 (SAA2)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg/50ug/100ug/1mg
| 规格： | 50ug/100ug/1mg | 产品价格： | ￥1280.0-￥3980.0 |
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| 规格： | 50ug/100ug/1mg | 产品价格： | ￥1280.0-￥3980.0 |
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验尘螨性变应原抗原表位的研究对变态反应的调节及治疗的可能性 (1)选择向Thl细胞 免疫应答发展多肽的原则：大剂量皮下注射变应原3～5年，可导致Thl细胞因子的产生；多价特异性多肽及重组变应原使用，使之避免可能产生IgE相关的效应途径。Thl细胞导向佐剂的使用：口服、鼻滴、舌下给药高剂量多肽均可使特异性抗原-Th2细胞产生耐受；使用能选择性诱导产生几-12的APC特异性变应原，如蜂毒磷酸化A2特异性多肽及第1类变应原(Feld-1)特异性多肽；DNA疫苗可诱导IFN-γ的T
结合较少的SDS，因此阻碍了蛋白的泳动。富含脯氨酸的蛋白会在SDS-PAGE胶中移动得特别慢。但是如果蛋白的等电点在5-9之间，并且组成的氨基酸组分没有明显的偏好，那么目的蛋白迁移率与预期相差较远就很有可能不是由于凝胶电泳造成的。 这个时候最好利用C-端或者N-端的标签进行Western Blot，看是否由于蛋白被蛋白酶降解而导致多条目的条带或者比预期小很多的条带出现。如果蛋白酶过高可以尝试换个缺陷菌株。 Q2：如何得到可溶的蛋白？ A2：如果希望得到能行使功能的蛋白，蛋白应该以可溶形式表达
特异性结合的单克隆抗体1。与Rho1D4抗体结合的表位可以作为针对膜蛋白的超高特异性纯化标记。通过基因修饰可在欲研究的目标（膜）蛋白C端加上Rho1D4标记。一旦加载上该序列，即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质去捕获目标蛋白，随后添加Rho1D4肽，通过竞争性结合基质抗体的方式来洗脱目标蛋白。采用这种方法，相比改变pH值等其他洗脱方式，更加地温和。图1：假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A2） Rho1D4的历史Rho1D4的表位
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