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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20oC 至 -80oC
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Rattus norvegicus (Rat)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Enolase, Neuron Specific (NSE)
- 抗体名:
神经元特异性烯醇化酶(NSE)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验近年来,肺癌的肿瘤标志物(tumor marker,TM)研究十分活跃。肺癌常用的肿瘤标志物很多,根据美国NACB准则,这里主要介绍神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体 (ProGRP)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和鳞状细胞癌相关抗原(SCCA)等几种比较肯定的肿瘤标志物。 表1 国际上不同专家组对肺癌标志物应用的建议 1.神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enol
15-3、CA19-9、PSA、SCC等),酶类(如神经元特异性烯醇化酶NSE、前列腺酸性磷酸酶PAP等),激素(hCG等),类固醇激素受体(如雌激素和孕酮受体等),单克隆免疫球蛋白和癌基因表达蛋白。
1.血清AFU升高主要见于原发性肝癌,与AFP联合检测,可提高肝癌的诊断阳性率。AFU活性高低与肝癌的大小和AFP浓度无明显相关,可作为原发性肝癌的早期诊断参考指标。肝癌术后观察血清AFU的水平,可用于监测疗效。 2.肺癌、乳腺癌、子宫癌以及肝硬化、糖尿病也可见升高。 3.妊娠期间,AFU升高,分娩后血清AFU迅速下降。 神经元特异性烯醇化酶(NSE) 正常情况:ELISA 0 ~ 12.5 μg/L,RIA 0.6 ~ 5.4 μg/L
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