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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20oC 至 -80oC
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Rattus norvegicus (Rat)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog (MYC)
- 抗体名:
V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验肿瘤都发现了能导致细胞恶性转化的核酸片段,称之为癌基因。来自病毒的称为病毒癌基因(v-onc),来自细胞的称为细胞癌基因(c-onc)或原癌基因(proto-oncogene),它们具有转化的潜能,可被激活成为癌基因。后来发现从 酵母 菌到人类的正常细胞几乎都有与之类似的片段。这种进化上的高度保守性表明它们具有重要的生物学意义。 最早发现的病毒癌基因是鸡Rous肉瘤病毒的v-src基因,以后又发现了与之同源的、见于正常鸡细胞的细胞癌基因(c-src
crk,SH2/SH3调节蛋白 vav ,SH2调节蛋白 胞核蛋白 转录因子 myc myb fos jun erb A,T3受体 从上表可以看出,所有细胞癌基因均在信号转导中扮演着重要角色。正因为如此,它们的异常或“变质”--表达失控或表达产物异常--对细胞的危害就很大,既然v-onc只是c-onc的一个复本,那么为什么c-onc本不致癌而v-onc又会致癌呢?实验证明,v-onc的致癌或由于表达的失控,或由于基因的突变,导致产物
而表达增强。 不同的癌基因有不同的激活方式,一种癌基因也可有几种激活方式。例如c-myc的激活就有基因扩增和基因重排两种方式,很少见c-myc的突变;而ras的激活方式则主要是突变,1985年Slamon检测了20种54例人类肿瘤中的15种癌基因,发现所有肿瘤都不止一种癌基因发生改变。细胞转化实验证明,各种癌基因之间存在协同作用。例如,单独v-myc或EJ-ras都不能使大鼠胚胎成纤维细胞转化,但是若将二者共转染PEF,8天后80%的细胞发生变化,那么为什么单独EJ-ras又可使Rat
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