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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20oC 至 -80oC
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Rattus norvegicus (Rat)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Nitric Oxide Synthase Trafficker (NOSTRIN)
- 抗体名:
一氧化氮合酶运输因子(NOSTRIN)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验表达作为重要的转录因子。体内 NO 水平和信号失调常发生于某些疾病状态。糖尿病病人具有低于全球的 NO 水平,动脉粥样硬化常常会导致 NO 信号通路受损。因此对 NO 信号通路的研究极具意义。NO 信号通路与 NOS 合酶:一氧化氮( NO )是由一氧化氮合酶( NOS )氧化 L- 精氨酸产生的,由于 NO 半衰期非常短(约 5s ),为此大多数对 NO 功能的研究都是以 NOS 活性的调控为基础。开发以 NOS 为靶标的抑制
(交流)SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)
有三条:一是经典途径,即通过免疫动物产生多克隆抗体;二是细胞工程途径即用杂交瘤技术生产单克隆抗体;三是利用基因工程途径表达和改造抗体。 但是,蛋白类抗体的生产与应用存在如下限制: 毒性抗原免疫动物承受不了,免疫原性弱的难以产生抗体; 杂交瘤产生于鼠,治疗应用受限(HAMA);异源抗体在诊断中产生非特异性反应(假阳性),还受到类风湿因子和自身抗体的干扰; 成本高、费时费事,罕见抗体需大量筛选才能得到; 克隆株(细胞)的有效保存不易,有些杂交瘤难以在体内生长; 批间
DNA发生反应。然后用酶标羊(或兔)抗鼠IgG抗体及相应底物进行显色。使用这一方法,可检测出单个抗原分子。材料与试剂包括: ①所测物的单克隆抗体(鼠);②所测物的多克隆抗体(兔);③生物素化羊抗鼠IgG;④生物素化羊抗兔IgG;⑤生物素化dUTP;⑥Klenow聚合酶;⑦PCR反应液;⑧引物(自行设计);⑨生物素化DNA标记分子。
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