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- 2025年11月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Interleukin 1 Receptor Type I (IL1R1)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
应用重组DNA将目标基因进行表达得到的蛋白质成为重组蛋白，重组蛋白在生物信号传导过程，药物研发，科学研究中扮演着重要角色。下面来介绍一下重组蛋白的生产工艺流程。
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验的就数 ↓ 同源重组基因敲除技术 细胞染色体DNA能够和外源DNA发生重组，用设计的同源片段替代靶基因片段，可达到基因敲除的目的。 主要步骤： 构建基因敲除重组载体 ↓ 重组DNA导入受体细胞 ↓ 筛选成功重组的细胞 ↓ 后续检测 但它的缺点也很明显 1速度慢，效率低（DNA的同源重组频率一般只有10-6左右）：加长两端的同源序列有助于重组，但加大了构建基因敲除载体的难度。该技术主要通过大量培养来增加
。中枢耐受很可能是胸腺表达P53的结果，可能是特定P53有效的诱导阻碍了在正常组织CTL参加的免疫[27]。不过，分离的高亲和力特定CTL至少有两种HLA限制的P53表位[28,29]，特别是在结肠癌患者中发现的特异P53TH细胞参加的免疫，这些多处表达的抗原，其耐受不是绝对的[30]。 疫苗的设计：从简单到复杂 靶细胞毒性T细胞应答 肿瘤相关CTL表位的识别[31]导致最后形成了一个分子限定 的特异性抗原疫苗：最小MHC-Ⅰ类限定的一个单纯人工制造肽CTL表位使不完全佐剂乳化。在一类
程度的重叠与区别。迄今为止，外泌体的分离方法尚无公认的“金标准”。由于技术的限制，无论采用何种方法，都无法将外泌体与其他EV 亚群彻底分离，因此，目前在递送载体方面的研究和应用中，外泌体常与其他 EV 亚群混合使用。哺乳动物和植物细胞均能产生外泌体。外泌体是一个具有高度异质性的群体，其异质性表现在多个方面，包括大小异质性、包含物异质性、功能异质性和细胞来源异质性。不同细胞来源的外泌体其大小、表面受体和内容物往往具有不同特征。细胞靶向分子、细胞黏附分子、代谢物和核酸等在外泌体的形成过程中被包裹在囊泡腔内
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