- ￥3200
- wksubio
- 可以定制
- 高
- china
- ABE10096
- 2025年12月19日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 灵敏度：
高
- 适应物种：
不限
- 库存：
不限
- 供应商：
瓦兰生物
- 检测范围：
可以定制
- 检测方法：
酶联免疫法
- 应用：
科研单位
- 标记物：
26S PSM
- 样本：
液体
- 规格：
96t
中文：人26S蛋白酶体(26S PSM)ELISA Kit
英文：Human 26S proteasome,26S PSM ELISA Kit
货号：ABE10096
在使用26S蛋白酶体 (26S PSM) ELISA Kit时，遵循正确的操作步骤和注意事项是确保实验结果可靠的关键。以下是操作步骤和注意事项：
一：操作步骤
1. 试剂准备
- 按照说明书准备所有试剂，确保试剂在使用前充分混匀。
- 检查试剂的有效期，确保使用的试剂未过期。
2. 样品准备
- 收集大鼠样品（如血清、组织匀浆等），并根据说明书要求进行稀释。
- 样品应在冰上保存，避免反复冻融。
3. **标准品准备**
- 按照说明书中的指导，制备标准曲线所需的标准品，确保稀释倍数正确。
4. 板子涂覆
- 将标准品和样品加到ELISA板的相应孔中，注意避免交叉污染。
- 记录每个孔的样品类型及其稀释倍数。
5. 孵育
- 根据说明书要求，进行适当时间和温度的孵育，通常在室温或4°C下进行。
- 在孵育过程中，确保板子覆盖，以防蒸发。
6. 洗涤
- 使用洗涤缓冲液对板子进行洗涤，通常需要多次洗涤以去除未结合的成分。
- 确保每次洗涤后将孔中的液体彻底去除。
7. 添加检测抗体
- 加入检测抗体，并按照说明书要求进行孵育。
- 注意避免气泡产生，以免影响结果。
8. 再次洗涤
- 再次用洗涤缓冲液洗涤板子，去除未结合的抗体。
9. 添加底物
- 加入底物溶液，观察颜色变化，反应时间应根据说明书的要求进行。
10. 终止反应
- 使用终止液停止反应，通常是酸性溶液。
11. 读数
- 使用酶标仪在指定波长下读取每个孔的光密度（OD值）。
注意事项
- 实验环境：在干净、无污染的环境中进行实验，尽量减少外部因素对结果的影响。
- 试剂保存：所有试剂应按照说明书要求保存，特别是酶和底物，避免光照和高温。
- 重复实验：每个样品和标准品应至少做三次重复，以提高结果的可靠性。
- 数据处理：在数据分析时，使用标准曲线进行定量，确保计算方法的准确性。
- 安全防护：实验过程中佩戴适当的个人防护装备，如手套和实验服，确保安全。
通过遵循以上操作步骤和注意事项，可以有效提高26S蛋白酶体ELISA实验的准确性和可靠性。
试剂盒组成
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注：标准品浓度依次为：8、4、2、1、0.5、0 ng/ml.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
- 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
- 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
- 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
- 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
- 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
- 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/ml。
- 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
- 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
- 有效期：6个月
免责声明
- 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
- 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles
Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: The samples should be centrifugated adequately and no hemolysis or granule was allowed.
Materials required but not supplied
1. Standard microplate reader(450nm)
2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.
3. 37 ℃ incubator
Precautions
1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.
2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.
3. Mix all reagents before using.
Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)
Materials supplied
| Name | 96 determinations | 48 determinations |
| Microelisa stripplate | 12*8strips | 12*4strips |
| Standard | 0.3ml | 0.3ml |
| Sample diluent | 6.0ml | 3.0ml |
| HRP-Conjugate reagent | 10.0ml | 5.0ml |
| 20X Wash solution | 25ml | 15ml |
| Chromogen Solution A | 6.0ml | 3.0ml |
| Chromogen Solution B | 6.0ml | 3.0ml |
| Stop Solution | 6.0ml | 3.0ml |
| Closure plate membrane | 2 | 2 |
| User manual | 1 | 1 |
| Sealed bags | 1 | 1 |
20、10、5、2.5、1.25、0 ng/mL.
Reagent preparation
20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.
Assay procedure
1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.
2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.
3. Add Sample: Add testing sample 10μl Then add sample diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.
4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C.
5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.
7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.
Calculation of results
- This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.
- First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.
- To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.
- Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.
- The sensitivity by this assay is 0.1 ng/mL.
- Standard curve
Storage： 2-8℃.
validity： six months.
FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
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