Gel DNA Extraction Kit
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)
Cat. No. DE0301
产品介绍
本试剂盒可快速、简单、高效地从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA片段,有效去除蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。吸附柱内采用独特的吸附材料,与常规硅胶膜相比可更加高效、专一地吸附核酸分子。
本试剂盒使用快速结合-洗涤-洗脱的简单步骤,纯化回收100bp~40kb DNA,回收率可达85%以上(<100 bp或>10kb 的DNA片段回收率为30-50%)。本试剂盒回收纯化的DNA片段纯度高,完整性好,可适用于各种应用,包括限制性酶切、PCR体外转录、标记、显微注射、放射标记测序、文库筛选、连接和转化等各种分子生物学实验。
包装清单
Cat. No. |
DE0301-50 (50次) |
DE0301-200 (200次) |
溶胶液PN |
30ml |
120ml |
漂洗液WB |
6ml |
24ml |
洗脱液EB |
5ml |
10ml |
吸附柱 |
50个 |
200个 |
收集管(2ml) |
50个 |
200个 |
说明书 |
1份 |
1份 |
储存条件
本试剂盒在室温(15–25℃)干燥条件下,可保存12 个月;更长时间的保存可置于2–8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 分钟,以平衡溶液温度。)
温馨提示:溶胶液PN具有刺激性,避免直接接触皮肤或溅入口腔。如操作不慎接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。本试剂盒仅供科学研究使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
注意事项
l 避免试剂长期暴露于空气中,溶液使用后请及时盖紧盖子。
l 对于<100 bp 和>10kb 的DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。
实验准备
l 第一次使用前,请按试剂瓶标签说明在漂洗液WB中加入无水乙醇,并做好标记。
l 试剂盒在使用前请检查溶液是否出现浑浊,如有浑浊现象,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,再使用。
操作步骤
- 1. 在紫外灯下切下含有目的DNA条带的琼脂糖凝胶(尽量切除多余部分),放入干净的1.5ml离心管中,称取重量。
2. 向胶块中加入2倍体积溶胶液PN(如凝胶重为0.1 g,其体积可视为100μl,依此类推)。50℃水浴放置10 分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟,直至胶块完全溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。
注意:胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在较高温度时结合DNA 的能力较弱。
- 3. 将吸附柱放入收集管中,用移液器将上一步所得溶液转移至吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm室温离心30秒,倒掉滤液。
- 4. 向吸附柱中加入600µl漂洗液WB,12,000rpm室温离心30秒,倒掉滤液。
注意:使用前请先检查是否已加入无水乙醇。如果纯化的DNA 是用于盐敏感的实验,例如平末端连接实验或直接测序,建议加入漂洗液WB后,静置2-5 分钟再离心。
- 5. 将吸附柱于12,000rpm室温离心2分钟,除去残留的漂洗液WB。取出吸附柱,放入一个新的1.5ml离心管中,室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液。
注意:漂洗液WB的残留会影响DNA的回收效率,会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。
- 6. 向吸附柱中间部位滴加适量洗脱液EB(10mMTris-HCl pH 8.5)或灭菌双蒸水(pH>7.0),室温静置2分钟。12,000rpm室温离心1分钟洗脱DNA。
注意:洗脱缓冲液EB置于65-70℃水中预热可提高回收率(DNA片段>10kb,建议用65-70℃预热后的EB洗脱)。DNA 产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。
DNA浓度及纯度检测
l 测定方法:回收得到的DNA 片段可用紫外分光光度计检测浓度与纯度,也可用琼脂糖凝胶电泳粗略估计;
l 浓度计算:DNA 应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA;计算公式为:
dsDNA浓度=A260 *50*稀释倍数µg/ml
ssDNA浓度=A260 *40*稀释倍数µg/ml
纯度恒量:OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
问题指南
问 题 |
可能原因 |
解决方法 |
未回收得到DNA片段 |
溶胶不彻底 |
补加溶胶液并延长溶胶时间直至胶块完全溶化。 |
漂洗液WB使用前未加入无水乙醇 |
请按试剂瓶标签说明在漂洗液WB 中加入无水乙醇,并做好标记。 |
DNA产量低 |
溶胶不彻底 |
补加溶胶液并延长溶胶时间直至胶块完全溶化。 |
洗脱效率不高 |
若用无菌水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内,可以用NaOH 将无菌水的pH值调到此范围。 |
DNA片段>10kb,建议用65-70℃预热后的EB洗脱 |
建议将洗脱液EB用1.5ml离心管分装后使用,以避免被高盐或酸性溶液污染。 |