琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

Gel DNA Extraction Kit

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱型）

Cat. No. DE0301

产品介绍

本试剂盒可快速、简单、高效地从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA片段，有效去除蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。吸附柱内采用独特的吸附材料，与常规硅胶膜相比可更加高效、专一地吸附核酸分子。

本试剂盒使用快速结合-洗涤-洗脱的简单步骤，纯化回收100bp～40kb DNA，回收率可达85%以上（<100 bp或>10kb 的DNA片段回收率为30-50%）。本试剂盒回收纯化的DNA片段纯度高，完整性好，可适用于各种应用，包括限制性酶切、PCR体外转录、标记、显微注射、放射标记测序、文库筛选、连接和转化等各种分子生物学实验。

包装清单

Cat. No.	DE0301-50 （50次）	DE0301-200 （200次）
溶胶液PN	30ml	120ml
漂洗液WB	6ml	24ml
洗脱液EB	5ml	10ml
吸附柱	50个	200个
收集管（2ml）	50个	200个
说明书	1份	1份

储存条件

本试剂盒在室温（15–25℃）干燥条件下，可保存12 个月；更长时间的保存可置于2–8℃。（注意：当低温贮存时，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 分钟，以平衡溶液温度。）

温馨提示：溶胶液PN具有刺激性，避免直接接触皮肤或溅入口腔。如操作不慎接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。本试剂盒仅供科学研究使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

注意事项

l 避免试剂长期暴露于空气中，溶液使用后请及时盖紧盖子。

l 对于<100 bp 和>10kb 的DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。

实验准备

l 第一次使用前，请按试剂瓶标签说明在漂洗液WB中加入无水乙醇，并做好标记。

l 试剂盒在使用前请检查溶液是否出现浑浊，如有浑浊现象，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，再使用。

操作步骤

1. 1. 在紫外灯下切下含有目的DNA条带的琼脂糖凝胶（尽量切除多余部分），放入干净的1.5ml离心管中，称取重量。

2. 向胶块中加入2倍体积溶胶液PN（如凝胶重为0.1 g，其体积可视为100μl，依此类推）。50℃水浴放置10 分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。

注意：胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA 的能力较弱。

1. 3. 将吸附柱放入收集管中，用移液器将上一步所得溶液转移至吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm室温离心30秒，倒掉滤液。
   1. 4. 向吸附柱中加入600µl漂洗液WB，12,000rpm室温离心30秒，倒掉滤液。

注意：使用前请先检查是否已加入无水乙醇。如果纯化的DNA 是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入漂洗液WB后，静置2-5 分钟再离心。

1. 5. 将吸附柱于12,000rpm室温离心2分钟，除去残留的漂洗液WB。取出吸附柱，放入一个新的1.5ml离心管中，室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液。

注意：漂洗液WB的残留会影响DNA的回收效率，会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。

1. 6. 向吸附柱中间部位滴加适量洗脱液EB（10mMTris-HCl pH 8.5）或灭菌双蒸水（pH＞7.0），室温静置2分钟。12,000rpm室温离心1分钟洗脱DNA。

注意：洗脱缓冲液EB置于65-70℃水中预热可提高回收率（DNA片段>10kb，建议用65-70℃预热后的EB洗脱）。DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。

DNA浓度及纯度检测

l 测定方法：回收得到的DNA 片段可用紫外分光光度计检测浓度与纯度，也可用琼脂糖凝胶电泳粗略估计；

l 浓度计算：DNA 应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA；计算公式为：

dsDNA浓度=A260 *50*稀释倍数µg/ml

ssDNA浓度=A260 *40*稀释倍数µg/ml

纯度恒量：OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

问题指南

问 题	可能原因	解决方法
未回收得到DNA片段	溶胶不彻底	补加溶胶液并延长溶胶时间直至胶块完全溶化。
	漂洗液WB使用前未加入无水乙醇	请按试剂瓶标签说明在漂洗液WB 中加入无水乙醇，并做好标记。
DNA产量低	溶胶不彻底	补加溶胶液并延长溶胶时间直至胶块完全溶化。
	洗脱效率不高	若用无菌水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内，可以用NaOH 将无菌水的pH值调到此范围。
		DNA片段>10kb，建议用65-70℃预热后的EB洗脱
		建议将洗脱液EB用1.5ml离心管分装后使用，以避免被高盐或酸性溶液污染。