大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒

大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒品牌，规格96tests（大规格）：860g、48tests（小规格）：500g；ELISA试剂盒保存在2-8°C的条件下（权威人士建议4°C恒温，实验效果更佳），本产品液体盒装，运输时，勿重压、勿潮湿条件下存储，勿过热过冷，导致试剂失效，实验前，大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒请仔细阅读产品说明书。
英文学名：Phosphorylation of nuclear factor κB inhibitor protein in rat α (pIKBα) ELISA kit
科研名称：大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒说明书
实验名称：大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)检测试剂盒
大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒问：间接法检测抗体，大体过程如下：
包被（4度过夜），PBST洗涤，封闭(5%脱脂奶粉)，洗涤，加入一抗，洗涤，加入二抗，洗涤，我设置的阴性对照就是第一步直接在孔中加100ul 包被液，没有加我的蛋白，照理说，没有蛋白最后就不应该显色，怀疑是二抗没洗涤干净所以才显色，洗涤了至少5次以上，最后还在纸上使劲拍干，但是最后还是显色，求高人指点~~（包被液是碳酸盐缓冲液，稀释液assay buffer: PBS：KH2PO4,Na2HPO4.12H2O,NaCL,KCL,Tween-20，我的一抗二抗都是用这个稀释液配的，封闭液也是用稀释液配的脱脂奶粉，没有血清啊）
大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒答：
1.可能封闭效果不好
2可能封闭液脱脂奶粉可以和一抗交叉反应
3.一抗没有洗涤干净
4.加样时操作出现错误。
大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒先确定封闭有没有问题，洗的话二抗确实多洗几遍没错，没有洗板机，每次洗可以摇晃板子，每遍1-2分钟，也可以多设置几个阴性孔，观察结果，看是不是没洗干净的问题。加样尽量加到底部，避免沾壁！
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