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- 2025年12月03日
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CHIP技术服务
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
一、CHIP技术定义与核心原理
染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation, CHIP） 是一种研究蛋白质与DNA相互作用的关键技术，主要用于定位特定蛋白（如转录因子、组蛋白修饰酶）在基因组上的结合位点，或分析表观遗传修饰的分布。其核心原理基于以下步骤：
- 活体交联：通过甲醛固定细胞，使蛋白质与DNA的相互作用在天然状态下被锁定（如所述）。
- 染色质片段化：利用超声或微球菌核酸酶将染色质随机剪切为200-500 bp的片段。
- 抗体富集：特异性抗体识别目标蛋白，通过免疫沉淀（IP）捕获蛋白-DNA复合物。
- DNA纯化与分析：解交联后释放DNA，通过qPCR、测序（ChIP-seq）或芯片（ChIP-chip）分析结合位点。
技术优势：
- 高特异性：直接反映活细胞内的蛋白-DNA动态结合。
- 多维度兼容性：可与高通量测序、单细胞分析等技术结合。
二、标准化实验流程与关键参数
1. 实验流程（以哺乳动物细胞为例）
| 步骤 | 技术细节 | 优化要点 |
|---|---|---|
| 细胞交联 | 1%甲醛处理10-15分钟（4℃），甘氨酸终止反应 | 过度交联（>15分钟）会导致染色质难以剪切 |
| 染色质破碎 | 超声参数：功率30% (Branson S450)，15秒脉冲/45秒间隔，总时长10-15分钟 | DNA片段大小需通过琼脂糖电泳验证（150-300 bp为佳） |
| 免疫沉淀 | 抗体用量：1-5 μg/10⁶细胞，4℃旋转孵育过夜 | 抗体需验证特异性（如使用KO细胞作为阴性对照） |
| DNA回收与纯化 | 蛋白酶K消化（65℃，2小时），酚-氯仿抽提或商业试剂盒纯化 | 避免DNA片段丢失（低起始量样本建议使用硅胶柱纯化） |
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