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文献和实验碱变性法 取血清20ul,加入1mol/L NaOH 20ul,37℃30min,离心,加 1mol/L HCl 20ul,离心后,取上清5ul,用于PCR扩增.*亦有用10ul血清加NaOH至 0.2mol/L,37℃1h,再加HCL中和离心后取上清10ul做PCR,其特异性和敏感性较前法 更好. 煮沸法 经离心洗涤过的组织细胞,分泌物及血液标本,加适量无菌蒸馏水或PBS,混匀 后,100℃煮沸10~15min,14000r/min 10min,取上清做
免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7.同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)悬浮细胞:1)收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 lg/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充
,离心弃上清,加200ulTBS重悬沉淀,此为阳性噬菌体扩增液。经几轮扩增至所需的滴度。10:30将IPTG/Xgal平皿板放入370C恒温箱中预温,准备水浴箱等测滴度用品。11:00用LB培养液以100/1000倍系列稀释噬菌体。微波炉中溶化顶层胶,每3ml分装在一个无菌培养管中,每个稀释度的噬菌体一个,将这些培养管置于450C水浴中备用。11:30每200ul细菌培养物分装到微量离心管中。每个噬菌体稀释度10ul分别加到上述细菌培养物中,室温下孵育1-5分钟。转到上述含顶层胶的无菌培养管中,快速
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