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- YM-KJ1192
- 2025年08月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
远慕生物
- 检测范围：
科研实验
- 检测方法：
双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)
- 样本：
血液、尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等
- 规格：
96T/48T
人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒说明书
上海远慕生物长期提供：ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、抗体、抗原、标准品等，价格实惠，质量有保证,信誉第一，竭诚欢迎新老客户咨询洽谈业务！
Human anti-filaggrin antibody,AFA ELISA Kit
产品货号：YM-KJ1192
规格：96T/48T
欢迎来电咨询订购：Elisa试剂盒，人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA检测试剂盒
【实验准备】：
1. ELISA试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
【标本要求】：
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 .
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
【操作步骤】：
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【计算结果】：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.2IU/L - 6IU/L
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文献和实验关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结
检测方法。 但是任何特定的ELISA检测系统有其特定的检测下限, 在本工作中, 茧壳蛋白对抗仿蜘蛛牵丝蛋白抗体的弱的非特异结合, 以及为溶解样品采取的对样品的特殊处理方法(9 mol/L LiBr, 65 ℃), 是限制检测下限的主要因素。 仿蜘蛛牵丝蛋白表达量过低时, 采用ELISA系统检测仍具有一定困难。 对于仿蜘蛛牵丝转基因蚕而言, 希望得到的是高表达的个体, 其表达量应当高于本方法能测定的下限才好。 如果要检测出更低的仿蜘蛛牵丝蛋白的表达量, 制备另一种动物的抗仿蜘蛛牵丝蛋白抗体, 采用夹心法进行ELISA
号丝集蛋白的氨基酸序列进行分析，合成了一条以瓜氨酸代替精氨酸的约20个氨基酸残基的肽链，并证实瓜氨酸是RA患者血清中抗丝集蛋白相关抗体识别的主要抗原决定簇成分。应用合成的瓜氨酸肽作为基质，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)可自RA早期患者的血清中检出抗瓜氨酸肽抗体，甚至在临床症状出现前就可检测到。但是，由于瓜氨酸肽的肽链较短，在溶液中的构象欠稳定，影响抗体对肽的亲和力。因此，应用β转角构象的肽链易与抗体结合的原理，形成了以环化肽模仿最初抗原决定簇β-转角构象的研究理念，以提高其对抗体的亲和
%-90%，是 2010 年 ACR/EULAR 颁布的 RA 分类标准中的血清学检测项目之一。另外，IgA-RF 和 IgG-RF 对 RA 的诊断也可能有一定提示意义。免疫比浊法、ELISA 和化学发光法是目前常用的 RF 定量检测方法。除 RA 外，RF 也可见于其他自身免疫病、多种感染以及肿瘤性疾病等。 2.1.10 抗瓜氨酸化蛋白／肽抗体 (ACPA):ACPA 是一组对 RA 高度特异的自身抗体。AKA/APF 属于抗丝聚蛋白抗体(AFA) 群，可出现在 RA 早期，同时与 RA 病情
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