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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
远慕生物
- 检测范围:
科研实验
- 检测方法:
双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)
- 样本:
血液、尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,阴道分泌物等
- 规格:
96T/48T
人循环免疫复合物(CIC)ELISA试剂盒说明书
上海远慕生物长期提供:ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、抗体、抗原、标准品等,价格实惠,质量有保证,信誉第一,竭诚欢迎新老客户咨询洽谈业务!
Human circulating immune complex,CIC ELISA Kit
产品货号:YM-KJ0886
规格:96T/48T
欢迎来电咨询订购:Elisa试剂盒,人循环免疫复合物(CIC)ELISA检测试剂盒
【实验准备】:
1. ELISA试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器,EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
【标本要求】:
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞:
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6. 组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 .
8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
【操作步骤】:
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,依次进行稀释数倍。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30倍(48T 的20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【计算结果】:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
人循环免疫复合物(CIC)ELISA试剂盒 试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
0.2IU/L - 6IU/L
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文献和实验免疫复合物增多,病情活动,但是对诊断没有特异性价值。2、冷球蛋白测定亦可称冷免疫球蛋白,是在低温自然沉淀,加热后又能溶解的蛋白复合物。当血液中出现冷球蛋白时,称冷球蛋白血症,在红斑狼疮病人中较多见。有时见两小腿部皮下紫癜,而血小板检查正常,这是由于冷球蛋白在皮下沉淀的结果,该方法对判断病情变化和指导治疗有参考价值。二、相关问题1、问:“红细胞免疫黏附,清除体内CIC”中的“CIC”是什么意思?答:循环免疫复合物(Circulationimmunecomplex,CIC)又称可溶性免疫复合物,分子
循环免疫复合物(CIC)的检测方法大致可分为两类,即抗原特异性方法和抗原非特异性方法。前者通过区别游离的抗原和与抗体结合的抗原,选择性测定含有某种特定抗原的IC。在已知由某种抗原引起的免疫病理反应的疾病中,可应用此类方法。抗原非特异方法,则不考虑形成IC抗原的性质,根据免疫球蛋白分子在结合抗原以后发生的物理学和生物学特性的改变进行检测。由于体内形成的CIC可能涉及多种抗原—抗体系统。所以临床上多采用此法。其检测方法种类繁多。大致可归纳为:1、物理方法 根据IC分子量大小,表面电荷和溶解度等特性
免疫复合物在体内存在有两种方式,一是存在于血液中的循环免疫复合物(CIC),一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下,免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂,所以抗原特异性方法并不常用。 一、循环免疫复合物的检测 根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性,已经设计出很多检测CIC的方法(表24-4),本章只述及常用的代表性方法。 表24
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