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各类细胞培养小结

蒸汽灭菌20分钟，室温保存。 2.原代血管内皮细胞的获取与培养　按Jaffe等人〔1〕的方法加以改进。在无菌条件下取新生儿脐带，剪去钳痕和凝血块阻塞部分，找到脐静脉。一端插上带有胶管的玻璃管结扎固定，经胶管接注射器，用生理盐水灌洗。待脐静脉内的残血除净后，用37℃ PBS，冲洗两次，将另一端用铁夹夹闭，向脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶8～10ml，夹闭胶管放入已灭菌的大平皿中。37℃孵育12min，在此期间经常翻动脐带使酶溶液在血管内流动以促使内皮细胞均匀与酶接触。取出脐带后轻轻挤压管壁，将含有内皮

细胞培养常见问题解答

都吹打几次，以防细胞不是均匀的分散在培养基中，造成加样不均。加样时使枪头贴着孔壁缓慢加入，使液体自然流满即可。都加完后平稳拿到镜下观察铺的很漂亮的。听别人说铺完后在96孔板的四个角轻轻磕几下，但我试过，这样效果反倒不好！ 我觉得你的问题可能是消化的不好，我的经验希望能有帮助： 1、对细胞的选择要注意，要选择状态好的细胞，密度要选分布瓶底80％为宜； 2、消化时，不要忘了用PBS（或纯的不含血清的培养基）洗一遍，加0.25％的胰酶1ml消化2-3分钟