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1 动物总蛋白提取
2 植物总蛋白提取
3 真菌总蛋白提取
4 细菌总蛋白提取
5 包涵体纯化
6 修饰蛋白纯化
7 His蛋白纯化
8 GST蛋白纯化
9 其他标签蛋白纯化
10 标签蛋白切割酶
11 蛋白浓度测定
13 蛋白酶抑制
14 蛋白样品污染清除
15 SDS-PAGE
16 长效期SDS-PAGE
17 Tricine-SDS-PAGE
19 蛋白质分子量标准
20 蛋白质PAGE胶回收
21 PAGE胶染料
22 Western Blot
23 Western Blot AP检测
24 Western Blot HRP检测
25 Western Blot 胶体金检测
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文献和实验酸纤维素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的检测。丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS或其它适当溶液洗去。因此,蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜,用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。注意:丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。使用说明 将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液
丽春红(Ponceau S)染色是 WB 实验中的一个重要环节,今天就来给大家详解丽春红染色的作用和操作方法。丽春红染色作用可用于 PVDF 膜,硝酸纤维素膜和和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。丽春红染色原理丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。丽春红特性丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS 或其它适当溶液洗去。为什么要用丽春红染色?通过丽春红染色可验证转膜效率,及每孔上样蛋白总量是否均等,可以帮助后续实验进行
封闭及杂交 在做杂交时,个人建议:还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育,这样节约抗体。 操作开始: 1. 将膜用 TTBS 从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭 1 h。必要时可先用丽春红染色(2%乙酸,0.5%丽春红的水溶液)观察蛋白条带,再用去离子水和 TTBS 将丽春红洗脱后封闭,如用蛋白 marker 则可省略此步。 2. 将一抗用 PBST 稀释至适当浓度(在 1.5 ml 离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验
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