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- 哺乳动物基因敲除试剂盒
- 2025年07月11日
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- 服务名称：
基因敲除
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上海君伯生物科技有限公司
本试剂盒用于在哺乳动物细胞中对靶基因进行完全基因敲除或敲入。试剂盒中的载体含有一个用于插入SgRNA的克隆位点，一个用于转录SgRNA的人U6启动子，一个受高效CAG启动子驱动的Cas9酶基因，以及Puro抗性筛选基因，因此可以更加方便地对发生基因敲除细胞进行筛选。需要注意的是，如果想要敲除的目的基因对于细胞的存活或增殖所必需，则极有可能难以获得完全基因敲除的细胞，但是依然可以获得只有一个同源基因敲除的“杂合子”细胞系。
（2）EZ-CasTM CRISPR-Cas9体外转录载体构建试剂盒（目录号：KB-1402）；
用于体外转录靶基因特异Sg-RNA与Cas9 mRNA。试剂盒中含有一个用于克隆与转录SgRNA的含有T7启动子的表达载体，以及一个受T7启动子驱动的Cas9基因的表达载体。在T7 RNA聚合酶（Promega, Life echnology等公司均有提供）的作用下，可以在体外转录出SgRNA与Cas9 mRNA用于后续的显微操作实验。
（3）EZ-CasTM CRISPR-Cas9-Nickase哺乳动物细胞表达载体构建试剂盒（目录号：KB-1403）；
本试剂盒用于在哺乳动物细胞中对靶基因进行更加精准的完全基因敲除或敲入。利用双切口策略，在哺乳动物细胞中对靶基因进行高特异性的完全基因敲除或敲入。试剂盒中的载体含有一个用于插入SgRNA的克隆位点，一个用于转录SgRNA的人U6启动子，一个受高效CAG启动子驱动的Cas9切口酶基因，以及Puro抗性筛选基因，因此可以更加方便地对发生基因敲除细胞进行筛选。需要注意的是，如果想要敲除的目的基因对于细胞的存活或增殖所必需，则极有可能难以获得完全基因敲除的细胞，但是依然可以获得只有一个同源基因敲除的“杂合子”细胞系。
（4）EZ-CasTM CRISPR-Cas9-Nickase体外转录载体构建试剂盒（目录号：KB-1404）；
用于体外转录靶基因特异Sg-RNA与Cas9 –Nickase mRNA。用于体外转录靶基因特异Sg-RNA与Cas9 切口酶mRNA。试剂盒中含有一个用于克隆与转录SgRNA的含有T7启动子的表达载体，以及一个受T7启动子驱动的Cas9切口酶基因的表达载体。在T7 RNA聚合酶（Promega, Life echnology等公司均有提供）的作用下，可以在体外转录出SgRNA与Cas9 切口酶mRNA用于后续的显微操作实验。
（5）EZ-TransTM 哺乳动物细胞转染试剂盒（目录号：KB-1411）。
用于将外源质粒DNA或RNA高效转染入哺乳动物细胞。用于配合HMG-1401或HMG-1403试剂盒的使用效果更好。
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文献和实验形DNA结构、Holliday结构等，故易出现假阳性；测序耗时长（1-3天），常常出现测序无信号等问题。 今年年初，Genloci通过植物基因工程表达产生高纯度的Cruiser™酶，它是一种具天然强活性的核酸内切酶，与CelⅠ同源。该酶能够高效特异地识别异源双链DNA的突变位点，并从突变位点的3’-端高效地切割异源双链DNA，不会出现假阳性。 今年6月，Genloci推出Cruiser™基因敲除检测试剂盒，该试剂盒可广泛应用于精确检测人、哺乳动物、细菌、真菌、病毒以及植物基因的敲除，尤其适用于ZFN
形DNA结构、Holliday结构等，故易出现假阳性；测序耗时长（1-3天），常常出现测序无信号等问题。今年年初，Genloci通过植物基因工程表达产生高纯度的CruiserTM酶，它是一种具天然强活性的核酸内切酶，与CelⅠ同源。该酶能够高效特异地识别异源双链DNA的突变位点，并从突变位点的3’-端高效地切割异源双链DNA，不会出现假阳性。今年6月，Genloci推出CruiserTM基因敲除检测试剂盒，该试剂盒可广泛应用于精确检测人、哺乳动物、细菌、真菌、病毒以及植物基因的敲除，尤其适用于ZFN
CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
前期记录先确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- 目标基因背景调查设计 sgRNA 及引物CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后对前期文章的补充：设计 sgRNA 之后，需要对结果进行判断：但为什么 0.7044 分数的哪一个没有选，我也不知道为什么，总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上
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