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- 2025年10月23日
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文献和实验做了快一年的SYBR G的定量实验了,有一些心得,写出来大家交流下. 也是今天在学校的BBS上有人推荐这里的,觉得很不错. 我们用的机器是ABI 7900,我自己比较喜欢的试剂是ABgene的QPCR sybr ROX MIX. 2*试剂我一般再进行稀释一倍后使用,反应总体系是10ul. 用SYBR G来做的话,引物非常重要. 我设计引物使用Primer 5,一般选择上游引物跨最后和最后第二个外显子,下游引物在最后一个外显子中,实在找不到,可以前移,但是一定保证至少一条
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
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