Mynox® 支原体去除试剂

【简单介绍】

Mynox是目前全球唯一可杀灭支原体的生物制剂
有效去除细胞培养及病毒保存中支原体的污染

【详细说明】

产品说明：

Mynox是目前全球唯一可杀灭支原体的生物制剂 有效去除细胞培养及病毒保存中支原体的污染 规格：2次，5次，10次 特点： 彻底杀死支原体 Mynox是全球第一种也是唯一的以杀死支原体来去除污染的生物试剂。它取自枯草杆菌发酵以后的提取物，基于生物物理原理，特异性的与支原体膜结合，使其通透性改变，导致支原体迅速死亡。 对细胞无害 Mynox不会与细胞膜结合，故细胞毒性极低。 高效 实验证实，Mynox在三小时左右即可彻底有效的去除支原体。 非抗生素 无耐药菌株的产生 支原体去除试剂Mynox使用常见问题 Mynox说明书 相关文献：Mynox文献

所属公司：德国Minerva Biolabs公司产品 所属类别：支原体检测、去除、预防试剂

Mynox® 支原体去除试剂 1. 试剂及材料1.1 试剂盒组分操作手册Mynox试剂：无菌、即用型溶液（PBS缓冲液），PH 7.4，220 µl/管Cat. No. 10-0200 2 管Cat. No. 10-0500 5 管Cat. No. 10-1000 10 管 1.2 稳定性与保存Mynox在有效期（见包装盒标签）内具有很强的稳定性。应于2-8°C保存。运输过程中，应保持室温。1.3 其他所需的试剂及设备标准细胞培养设备培养基、胎牛血清、PBS缓冲液、胰酶无菌培养皿Venor®GeM支原体检测试剂盒（Minerva Biolabs公司）2. 应用及原理不论从生物学还是经济学角度考虑，去除细胞培养中的支原体感染，对于基础研究、诊断和生物技术的生产都是至关重要的。应用抗生素处理是杀灭或抑制细胞培养中支原体污染的最常用方法。一般来说，抗生素治疗不但不能有效持久地去除支原体，而且，抗生素还容易对细胞产生不良的细胞毒作用，并引起支原体菌株的耐药性。目前，Mynox是全球第一种也是唯一可杀灭支原体的生物制剂。实验证实，Mynox仅使用一次即可永久有效的消除支原体。 Mynox取自枯草杆菌发酵后的提取物。由于支原体没有细胞壁，只有简单的质膜，因此，Mynox基于生物物理原理，只与支原体膜特异性结合，改变支原体膜的通透性，导致支原体破裂死亡，而细胞膜不与Mynox结合，从而，不会改变细胞的任何特性，故细胞毒性极低。支原体杀死后，细胞能够很快恢复其正常的生长与繁殖状态。注意：Mynox仅限于基础研究使用。3. 样品材料3 .1 血清浓度的重要性反应混合物中脂肪和蛋白质的浓度可影响Mynox消除支原体的活性，例如：胎牛血清的浓度。这些成分可阻止Mynox与支原体膜的结合。因此，消除细胞培养中的支原体，应使用特定的标准细胞培养基，例如：D-MEM或RPMI 1640培养基。如果使用Mynox消除污染细胞中的支原体，胎牛血清的最佳浓度为5%。如果使用Mynox消除病毒中的支原体，建议使用无血清的培养基。3.2 Mynox的使用范围由于Mynox不与细胞膜结合，因此，它不能消除细胞内的支原体污染。然而，支原体污染通常发生在细胞外，只有penetrans种属的支原体能够进入细胞内，但是，迄今为止，尚未有关于penetrans种属支原体引起污染的报道。另外，为了减小血清对消除支原体的影响，还需制定适用于消除高蛋白、高脂情况下的支原体污染的方案。 Mynox利用生物物理的方法，与支原体膜结合，因此，Mynox必须直接接触支原体，才能有效杀除。我们建议使用胰酶消化细胞，使细胞充分脱落分离，与Mynox充分接触，从而，更有效地杀除支原体。3.3 Mynox是否对细胞有损伤同其他消除支原体的产品相比，Mynox对于贴壁和非贴壁系细胞的影响不大。通过对众多细胞系的测试，我们发现治疗后的细胞，不但支原体被完全杀除，而且，移种后的细胞仍然能够保持正常的高增殖率。4. 说明4.1 贴壁细胞系支原体的去除4.1.1 污染细胞和Mynox混合物的准备在直径为6cm的无菌培养皿中，将污染细胞与Mynox混合1. 加入2.8ml含有5%v/v胎牛血清的标准培养基2. 加入Mynox 200 µl（1管）3. 加入2 ml 细胞密度为1x10⁴至 1x10⁵的污染细胞混合物总体积为5ml。注意：1．确保对单一细胞进行支原体杀除（显微镜下观察!）。可根据需要延长胰酶消化时间。2．在加入污染细胞前，确保Mynox®已被添加在培养基中。将污染细胞直接加入到Mynox混合物中。4.1.2 去除支原体在正常细胞培养的条件下，将Mynox与污染细胞的混合物进行2个小时的培养，然后，弃去上清液，再加入标准的细胞培养基。将去除支原体后的细胞继续进行传代培养。注意：在污染细胞去除支原体期间，应经常观察Mynox对细胞的影响。如果发现细胞状态不佳，应立即停止反应，添加标准培养基，将Mynox混合物按1:5稀释。4.2 悬浮细胞系支原体的去除4.2.1 污染细胞和Mynox混合物的准备将污染细胞与Mynox混合在无菌离心管中1. 加入1.6ml 0.125%的胰酶和5mM EDTA PBS缓冲液2. 加入Mynox 200 µl（1管）3. 转移1.6 ml含有10%v/v胎牛血清的标准培养基和细胞密度为1x10⁴至 1x10⁵的污染细胞混合物总体积为3.4ml。注意：1．确保对单一细胞进行支原体杀除（显微镜下观察!）。可根据需要延长胰酶消化时间。2．在加入污染细胞前，确保Mynox®已被添加在培养基中。将污染细胞直接加入到Mynox混合物中。3．确保离心管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。胰酶可防止细胞聚集。如果，去除支原体过程中，不需要使用胰酶进行细胞分离，可添加PBS缓冲液，以保证细胞与Mynox混合物的总体积为3.4 ml。4.2.2 去除支原体1. 室温下，轻轻摇匀混合物2小时。2. 将细胞团离心5分钟 （600 x g） 并弃去上清液。3. 在不含Mynox的培养基中将细胞重悬。去除支原体更有效的方法是：将污染细胞在含有Mynox的培养基中培养1代。将污染细胞加入到5 ml含有5 % v/v 胎牛血清的培养基和150 µl Mynox的混合物中培养3天，然后，离心并弃去上清液，再继续在不含Mynox的培养基中进行传代培养。注意：在污染细胞去除支原体期间，应经常观察Mynox对细胞的影响。如果发现细胞状态不佳，应立即停止反应，添加标准培养基，将Mynox混合物按1:5稀释。 4.3 无包被病毒支原体的去除4.3.1 污染细胞和Mynox混合物的准备冻存或新鲜的细胞以及不含细胞碎片的悬浮液均可进行支原体杀除。病毒的滴度不影响去除效果，将污染细胞与Mynox混合在15ml无菌管中：将污染细胞与Mynox混合在无菌离心管中1. 加入1ml不含胎牛血清的标准培养基2. 加入Mynox 100 µl3. 将125 µl病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中混合物总体积为1.225 ml。注意：确保反应管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。4.3.2 去除支原体1. 将污染细胞与Mynox的混合物室温下培养2小时，并轻轻摇匀。2. 在培养基中，将Mynox稀释为1:10时，反应结束。在进行此步骤时，可以通过去除宿主细胞系的支原体污染，同时达到去除病毒中支原体污染的目的。最后的体积应达到混合液体积的10倍。注意：在被支原体污染之前，首先要检测宿主细胞系是否有支原体污染。 4.4 包被病毒支原体的去除包被病毒外层的脂质膜成分与支原体膜相似，也是Mynox结合的对象。根据使用Mynox的浓度和作用时间，这些病毒极易被Mynox杀除。为了能够彻底杀除支原体，预杀除支原体的病毒的滴度应高于106 TCID50。 4.4.1 污染细胞和Mynox混合物的准备冻存或新鲜的细胞以及不含细胞碎片的悬浮液均可进行支原体杀除。将污染细胞与Mynox混合在15ml无菌管中：1. 加入4.4ml不含胎牛血清的标准培养基2. 加入Mynox 100 µl3. 将0.5 ml病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中混合物总体积为5 ml。注意：确保反应管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。 4.4.2 去除支原体 将污染细胞与Mynox的混合物室温下培养2小时，并轻轻摇匀。在培养基中，将Mynox稀释为1:10时，反应结束。在进行此步骤时，可以通过去除宿主细胞系的支原体污染，同时达到去除病毒中支原体污染的目的。最后的体积应达到混合液体积的10倍。 注意：

在被支原体污染之前，首先要检测宿主细胞系是否有支原体污染。这个支原体去除过程，可多次用于病毒株的杀除，以确保所有支原体已被杀除。

5. 支原体检测在不添加抗生素的情况下，经Mynox去除的细胞培养物和病毒株应继续传代培养4代，然后，进行支原体污染的再测定。我们建议使用高敏感度的Venor®GeM支原体检测试剂盒（Cat.-No. 11-1025/1050/1100/1250），以测定支原体去除的效果。该试剂盒应用的PCR检测法，但是，去除支原体后，不宜立即采用PCR检测。因为，Mynox可改变支原体膜的通透性，使支原体破裂死亡，进而，达到杀除支原体的目的，同时，支原体DNA也会释放到培养基中，此时，应用PCR法检测，就可检到支原体DNA，从而，造成错误的阳性结果。在继续传代培养1-2代后，由于培养基的更换，细胞外不再含有支原体DNA。

Polymer Factory| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294723_Polymer-Factory_1.html;
Polyplus Transfection| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294724_Polyplus-Transfection_1.html;
Profoldin| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294725_Profoldin_1.html;
PerkinElmer| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294726_PerkinElmer_1.html;
PBL InterferonSource| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294727_PBL-InterferonSource_1.html;
Platypus Technologies| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294728_Platypus-Technologies_1.html;
Pluriselect| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294729_Pluriselect_1.html;
Pllabs| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294730_PLlabs_1.html;
QBG| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294731_QBG_1.html;
Quidel| http://www.ybiotechmall.com/enstyle/firstcatalog_3294732_Quidel_1.html;