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【简单介绍】
克隆载体(Cloning Vector):通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒,噬菌粒,酵母人工染色体。【详细说明】
克隆载体(Cloning Vector):通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒,噬菌粒,酵母人工染色体。
对载体的要求:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。
②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。
③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。
④容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作。
⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作
| 货号 | 品名 | 包装 | 价格 |
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文献和实验基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体(molecular cloning vector),它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻,分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭,外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星,宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞,并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又与火箭不一样,因为火箭在运载卫星的过程中分级脱落和烧毁。 尽管克隆载体
信息。因此,只有在这一段中可插入外源DNA而不致影响噬菌体的活性。用M13作为分子克隆载体的优点是从细菌中释放出来的噬菌体颗粒只含单链DNA,其中包含了克隆DNA片段的二条互补链中的一条,因此可用来作为对DNA测序的模板。另外,可用来产生单链的DNA探针以选择和分离互补的RNA。M13的RF型是双链DNA,便于限制酶的识别和切割,克隆进双链的外源DNA。从细菌培养液中大量抽取单链DNA。问题是插入M13的外源DNA超1000bp时就不稳定,在噬菌体增殖时会出现缺失。一般说,插入300~400bp是相当稳定的。 (三
,用pUC质粒转化LacZ基因有突变的大肠杆菌株(M15)时,因为由质粒表达的α-肽补充了大肠杆菌却失的α-肽,所以恢复了分解半乳糖的能力。在加入IPTG和X-gal的培养基上,长出蓝色克隆。如果在多克隆位点内插入外源DNA,由于它破坏了α-肽的表达,因而在加入IPTG和X-gal的培养基,不能长出蓝色克隆,这就是所谓的蓝白筛选。二、单链丝状噬菌体和噬粒 (一)大肠杆菌丝状噬菌体包括M13噬菌体f噬菌体等,其基因组均是单链闭环DNA分子,其中M13mp系列克隆载体是对野生型M13加以改造,插入了多克
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