pET载体pQE30UA

GST融合蛋白表达的问题，很怪，请高手热烈讨论

蛋白为44KD，融合后应为73KD，但是没有见到表达. 综合分析会是什么原因？该蛋白国外已在pQE30载体上表达成功，应该不会是稀有密码的原因造成表达终止吧？第1号和3号克隆已测序，表达框没有移码，基因全长正确。测序结果如下，请参考： AAATCGGATCTGGTTCCGCGTGGATCCCCGGAATTCCCGGGTCGACATGATACAAGTACTGATGGCTGCTGCAAGCTTTG

【原创】蛋白质不表达：常见原因及分析

喜欢转贴的，请注明来自中国生命科学第一网：丁香园。 根据自己体会和蛋白版的既往精华帖子，总结了没有发现蛋白质表达的原因，或者蛋白质不表达的原因，欢迎大家拍砖。 1.载体构建错误。 这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。 2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α（+）载体的构建

真DNA聚合酶可能会导致此问题。大肠杆菌 BL21（DE3）中的蛋白质表达重组pET-32α（+）载体可以表达所需的蛋白质，其在被异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后与大肠杆菌 BL21（DE3）中的109aa Trx•Tag TM融合。首先，将含有100μg/ ml氨苄青霉素的10ml LB培养基与含有重组pET-32α（+）载体的新鲜细菌菌落一起接种37℃过夜; 然后，将500-μl过夜培养物加入到含有100-μg/ ml氨苄青霉素的30-ml新鲜LB培养基中，在37℃接种直至OD 600