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- 2026年08月03日
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文献和实验了解一下。 实验目的：测定肝癌细胞 X 基因相对于正常肝细胞的表达量。通过荧光定量检测可得：肝癌细胞中 X 基因的 CT= 25，正常肝细胞中 X 基因的 CT= 26，所以，利用表达量倍数计算公式 2-△CT计算，发现肝癌细胞中的 X 基因表达量是正常肝细胞表达量的 2 倍。 但是，上面这个定量结果检测有效的前提是：必须保证两盘细胞的细胞数量完全一致；RNA 提取、逆转录以及定量效率及操作必须完全一致；不存在操作误差等。这显然是无法达到的。 那如何才能使这些误差不影响 X 基因
标准曲线绘制及扩增效率计算： 可以在 excel 上进行扩增效率的计算。稀释梯度可以设置为-1 /- 2/-3，每个梯度对应的 CT 值分别为 23.69 / 27.04 / 30.27，如下图，进行标准曲线绘制。通过标准曲线可以得到线性方程（y = -3.29 x + 20.42）与 R2 值（R2 = 0.9999）。将线性方程得到的斜率（-3.29）带入扩增效率计算公式中： 即可得到扩增效率。本基因使用 Vazyme #Q711 扩增效率为 101.35%。 只有当扩增效率满足 90
析就能得到 CT 值了（图 15B）。 图 15 7900 的 RQ 数据要用 RQ Manager 软件分析 与此类似的还有 7500 v1.x 版本的软件，如果做了 ddCt 的实验，然后在软件中直接打开分析的话，也是只能看到扩增曲线，却没有 CT 值一项。这时候需要新建一个 ddCt Study，然后再导入 ddCt 的实验，就可以正常分析得到 CT 值了。 从这么多案例中，我们也能看出来：一个 QPCR 实验要正常获得 CT 值的数据，好的实验设计、试剂样本、仪器耗材和正确的软件操作都必不可少
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