EMSA探针-AP1

Nature 重磅：林圣彩院士团队七年攻坚！首次破解「神药」二甲双胍作用靶点之谜

Nature 杂志发表了题为 Low-dose metformin targets the lysosomal AMPK pathway through PEN2 上的文章，通过化学合成二甲双胍的探针去「钓取」其结合靶点，然后再通过质谱分析进行解析，最终发现了治疗剂量的二甲双胍直接发挥作用的靶点及其内在分子机制，为糖尿病的治疗，乃至抗肿瘤、抗衰老的药物研发和应用提供了新的思路，这次历史性突破有望成为糖尿病药物治疗史上的里程碑事件。 图片来源：Nature 主要研究内容 PEN2 与二甲双胍结合

电泳迁移实验(EMSA)方法

改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如 下步骤操作：（1） 对于100微升标记好的探针，加入1/4体积即25微升的5M醋酸铵，再加入2体积即200微升的无水乙醇，混匀。（2） 在-70℃至-80℃沉淀1小时，或在-20℃沉淀过夜。（3） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心30分钟。小心去除上清，切不可触及沉。（4） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。（5） 加入100微升TE，完全溶解沉淀。标记好的探针最好立即使用

凝胶迁移实验（EMSA）实验方法

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、实验原理 EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物；这种复合