万类生物试剂促销:试剂盒8折优惠,高纯质粒小量制备试剂盒(离心柱型)-100T 原价320元,现价256元
产品名称:高纯质粒小量制备试剂盒(离心柱型)(试用装5T)
产品概述:高纯质粒小量制备试剂盒(Plasmid Mini Preparation Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行小量质粒的快速抽提的试剂盒。本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其他细菌成分去除,最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。本试剂盒快速,方便,无需使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也无需酒精沉淀,获得的质粒产量高,纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
注意事项:
1. 第一次使用时把试剂盒所提供的RNase A全部加到溶液P1中,混匀,并在瓶上做好标记,置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会混杂有微量RNA残留,这时可在溶液P1中补加RNase A即可。
2. 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入45ml(50次制备)无水乙醇,充分混匀,加入后请及时标记已加入乙醇。
3. 环境温度较低时,溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃 , 以免形成过量的泡沫。
操作流程:
1. 取1-5ml过夜培养的菌液,12000rpm离心30s,弃上清,收集菌体,尽可能的倒干上清。处理超过1ml菌液可以离心弃上清后,在同一个管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集足够的菌体。
2. 用250µl溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3. 加250µl溶液P2,温和地上下翻转6-10次使菌体充分裂解,直到溶液变得清亮。温和地混合,不要剧烈振荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时不应超过5min!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘稠后就可以做下一步。
4. 加350µl溶液P3,立即温和地上下翻转6-10次,室温放置5min。室温12000rpm离心15min,小心取上清。
5. 将吸附柱安置于收集管上,将上一步所得上清液加入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中,溶液太多可分两次加入),12000rpm离心1min,弃滤液。
6. 加入500µl去蛋白液PE,12000rpm离心30-60s,弃滤液。此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质,如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株,核酸酶含量丰富,应加此步骤;如所用菌株为XL-1 Blue和DH5α等缺陷性菌株,核酸酶含量低,则可略过此步骤。
7. 加入700µl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30-60s,弃滤液。
8. 重复步骤7一次,12000rpm离心30-60s,弃滤液。
9. 空柱12000rpm离心2min,室温放置3-5min,除去残留乙醇。
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加60-100µl洗脱缓冲液EB,室温放置1min,12000 rpm 离心1min洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50µl,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量。