- ￥228
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 20114ES60
- 2026年10月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
RIPA Lysis Buffer（Weak）
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
100 mL(20114ES60)
产品描述：
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。
本品为较为温和的裂解液（即RIPA裂解液（弱）），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
产品属性：
| 用途 | 蛋白抽提 |
产品特色：
1.适用性广：几乎适用于所有实验室培养的动物细胞和各种组织。
2.使用方便：即用型配方，节省实验时间。
3.选择性多：我司提供不同裂解强度的ripa裂解液，及不含抑制剂的ripa裂解液，客户可以根据自身实验需求进行选购。
应用案例：
一、细胞样品
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成0.5-1×106细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
二、组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
3. 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量）。
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
储存条件：
冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。
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文献和实验1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin
细胞沉淀后，加入预冷的 RIPA 液（含PMSF），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。轻轻混匀细胞悬液，用振荡器在 4℃ 振荡 15min 以裂解细胞。 用经蒸馏水预冷的橡皮或塑料细胞刮棒将贴壁细胞转移至一离心管中。 于 4℃，10000 rpm 离心裂解液 15 min，迅速转移上清至另一离心管中，弃掉沉淀。 将 Agarose protein A+G 珠子混匀：用预冷的 PBS 洗涤 Agarose protein A+G 珠子两次，并将其用 PBS 调
「救命！做 WB 蛋白样品提取时，样品加入裂解液，离心后发现管里有很多的胶状物，非常粘稠，有点像鼻涕！多加裂解液稀释一下仍然没有效果，蛋白浓度还变得很低。不死心的我把它戳出来玩了一会，戳戳戳仍然是一大团，这粘稠物是什么？对我的后续实验会有什么影响？」 当你看到这团粘稠的「鼻涕」，就意味着你即将经历下面五个难题的考验： 1. 样品吸液困难 堵塞移液器：离心后吸上清液的时候胶状物会堵塞移液器头，移液后上清液所剩无几。 无法分离上清液：样品太
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