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- 2025年07月14日
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文献和实验Troubleshooting for PCR and multiplex PCR
temperature to 62-68º C Increase KCl (buffer) concentration to 1.2x-2x, but keep MgCl2 concentration at 1.5-2mM. Increase MgCl2 concentration up to 3-4.5 mM but keep dNTP concentration constant. Take less primer Take less DNA template Take less Taq
2 concentration is 1-4mM, under the standard reaction conditions specified. In our experiments, at a final dNTP concentration of 0.2mM, a MgCl2 concentration ranges of 1.5±0.25mM (in traditional PCR buffer) and of 2.0±0.5mM (in PCR buffer with (NH4)2SO4
浓度的寡核苷酸引物是十分重要的。我 们发现过量的引物通常会产生许多妨碍随后分析的额外扩增产物。浓度为 5pmol 的引物可得到非常清晰及有效的扩增产物。当然，最好是找到你要扩增的每个序列的最佳引物量。 没有必要用全部的 cDNA 反应产物进行PCR扩增。可取等分量 cDNA 样品用几组 不同的引物作 PCR 分析;例如:一份 cDNA 反应物可用于研究几种不同类型的 RNA。cDNA反 应物通常用 PCR 缓冲液衡释 5 倍。将cDNA的浓度隆低至 0.2mM，此浓度更适于 Taq聚合酶。 dNTP
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