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文献和实验相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 1.1原理 福林试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质分子 中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等),它使蛋白质及其水解产物呈上述反应,利用这个原理可以测定蛋白酶活力的强弱。以酪蛋白为作用底物,在一定pH值和温度下,同酶液反应,经一段时间后加入三氯乙酸,终止酶的反应,并使残余的酪蛋白质沉淀,同水解产物分开。经过滤后取过滤
络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度 成正比,可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。 二、 试剂 和器材 试剂 : (1) 标准蛋白溶液(5mg/ml):准确称取已定氮的酪蛋白(干酪素或牛血清白蛋白)用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制,冰箱存放备用。 (2) 双缩脲试剂:溶解1.5g硫酸铜(CuSO 4
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