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- 武汉
- RNA pull down
- 2026年02月24日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 服务名称：
RNA pull down
- 提供商：
武汉金开瑞生物工程有限公司
服务介绍
蛋白质与RNA的相互作用是许多细胞功能的核心，如蛋白质合成、mRNA组装、病毒复制、细胞发育调控等。使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。若待检测目的蛋白明确，选择WB鉴定；若不明确，则可选择质谱鉴定。
服务优势
- 高特异性：富集与特定RNA序列相互作用的蛋白质，具有高度的特异性
- 高灵敏度：能够检测低丰度的RNA结合蛋白质，提供高灵敏度的检测能力
- 广泛适用性：可用于研究各种RNA结合蛋白质，包括转录因子、RNA结合蛋白和翻译调控因子等
- 可定量分析：通过引入外源标记或荧光标记的RNA探针，可以定量测量RNA与蛋白质的结合强度
- 联合应用：可与其他技术相结合，如质谱分析、蛋白质组学方法和转录组学方法等，进一步深入研究RNA-蛋白质相互作用的功能和调控网络
服务流程
- 接受订单及样品
- RNA探针标记
- 与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物
- 与磁珠结合，洗脱
- WB检测或者质谱鉴定
- 结果交付
客户提供
- RNA序列或者RNA序列构建的质粒（种属）
- 相同种属的细胞样品
最终交付
- 基因合成测序报告；
- 构建含目的基因的质粒、菌液，测序报告；
- 体外转录模版的sense&antisense引物、模版电泳图；
- RNA Pull down蛋白SDS-PAGE银染；
- 质谱鉴定报告。
服务说明
案例展示
相关技术服务
● 双荧光素酶报告系统 ● 酵母双杂交 ● EMSA
● CoIP ● RIP-qPCR ● DNA pull-down
● ChIP-qPCR ● 酵母单杂交 ● CUT&Tag
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1、RNA pull-down的实验步骤
● 设计和合成RNA探针：根据目标RNA序列的特定区域设计和合成RNA探针，通常使用化学修饰或放射性标记来标记RNA探针。
● 准备RNA结合反应体系：将RNA探针与细胞提取物、组织提取物或体外合成的蛋白质混合，形成RNA-蛋白质复合物的反应体系。可以添加适当的缓冲液和辅助物质来维持反应条件和增加特异性。
● 进行RNA pulldown：将RNA探针与固相材料（如琼脂糖珠子或磁珠）结合，通过亲和吸附的方式富集目标RNA-蛋白质复合物。可以使用离心管、微量管或固相提取柱等不同形式的富集材料。
● 洗涤和纯化：对富集的RNA-蛋白质复合物进行洗涤，以去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质。可以使用适当的洗涤缓冲液来实现选择性的洗涤步骤。
● 蛋白质鉴定和分析：对富集的RNA-蛋白质复合物进行蛋白质鉴定和分析，常用的方法包括质谱分析（如质谱鉴定或定量蛋白质组学），Western blotting等。这些分析方法可以帮助鉴定和定量与目标RNA相互作用的蛋白质。
2、RNA pull-down应用场景
● 鉴定RNA结合蛋白质：用于筛选和鉴定与特定RNA序列结合的蛋白质，揭示RNA的结合伴侣和调控网络。
● 研究RNA结合蛋白质的功能：通过RNA pull-down实验，可以评估RNA结合蛋白质的功能，包括转录调控、RNA稳定性和翻译调控等。
● 研究RNA修饰修饰酶：可以用于鉴定与特定RNA修饰酶相互作用的蛋白质，了解RNA修饰的机制和调控。
● 探索RNA与疾病相关蛋白质的相互作用：通过RNA pull-down实验，可以揭示RNA与疾病相关蛋白质的相互作用，并深入了解其在疾病发生和进展中的作用。
3、研究RNA-蛋白质相互作用的几种常用技术简介、优势和适用范围
| 技术 |
简介 | 优势 | 适用范围 |
| RNA pull-down |
RNA pull-down技术用于研究RNA与与其相互作用的蛋白质之间的相互作用。该技术利用RNA的特异性结合能力，通过将RNA靶点固定在固相支持上，然后与细胞提取物或纯化的蛋白质混合，通过共沉淀实验检测RNA-蛋白质的相互作用。 | - 可以直接检测RNA与蛋白质之间的相互作用。 | - 研究RNA与蛋白质之间的相互作用。 |
| - 可以筛选和鉴定与特定RNA相互作用的蛋白质。 | - 揭示RNA在基因调控和细胞功能中的作用。 | ||
| - 可以揭示RNA在基因调控和细胞功能中的作用。 | - 研究RNA参与的信号通路和疾病机制。 | ||
|
- 可以与其他技术相结合，如质谱分析和转录组学方法，进一步研究RNA-蛋白质相互作用的功能和调控网络。 | |||
| CLIP-seq |
CLIP-seq技术（Cross-linking and immunoprecipitation followedby high-throughput sequencing）用于鉴定RNA与与其相互作用的蛋白质之间的结合位点。该技术结合了RNA与蛋白质的共价交联和免疫共沉淀，通过高通量测序分析交联后的RNA和结合蛋白质，鉴定它们的相互作用位点。 | - 可以鉴定RNA与特定蛋白质之间的结合位点。 | - 鉴定RNA与蛋白质之间的结合位点和相互作用模式。 |
| - 可以全基因组范围内分析RNA-蛋白质相互作用的模式和特征。 | - 揭示RNA参与的调控网络和疾病机制。 | ||
| - 可以揭示RNA参与的调控网络和疾病机制。 | - 研究RNA参与的信号传导和细胞功能。 | ||
|
- 可以提供高分辨率的RNA-蛋白质相互作用图谱。 | |||
| RNAi |
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种通过引入特定的小分子RNA（siRNA或shRNA）来抑制特定基因表达的技术。该技术可以靶向特定的RNA序列，并降低或抑制目标基因的表达。 | - 可以高度特异性地抑制目标基因的表达。 | - 研究基因功能和基因调控。 |
| - 可以进行基因功能研究、基因沉默和表达调控的实验。 | - 高通量筛选和功能验证。 | ||
| - 可以在细胞和整个生物体中进行基因敲除或敲下实验。 | - 研究信号传导和疾病机制。 | ||
|
- 可以研究基因调控、信号通路和疾病发生机制。 | |||
| RIP |
RIP（RNA Immunoprecipitation）技术用于研究RNA与与其相互作用的蛋白质之间的相互作用。该技术通过使用抗体特异性地免疫共沉淀RNA与其结合的蛋白质，从而鉴定和分析RNA-蛋白质复合物。 | - 可以鉴定RNA与特定蛋白质之间的相互作用。 | - 研究RNA与蛋白质之间的相互作用。 |
| - 可以研究RNA参与的转录调控、翻译调控和RNA稳定性等过程。 | - 揭示RNA参与的转录调控和翻译调控过程。 | ||
| - 可以揭示RNA-蛋白质相互作用在细胞功能和疾病发生中的作用。 | - 研究RNA-蛋白质相互作用在细胞功能和疾病发生中的作用。 | ||
|
- 可以与高通量测序等技术相结合，获得全基因组范围内的RNA-蛋白质相互作用图谱。 |
金开瑞-提供核酸和蛋白的整体研究方案：
武汉金开瑞生物工程有限公司是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。金开瑞极其注重平台技术提升，现已有多项自主知识产权和软件著作权专利，并已通过ISO9001质量管理体系认证，2018获批“千企万人”支持计划。公司以“细胞外囊泡”研究中心、基础生物医学实验中心、蛋白抗体中心和分子生物学中心为依托，提供核酸和蛋白的整体研究方案，与众多科研单位携手开展了大量的探索项目。截止到目前，已支持客户发表科研论文达1000+篇，累计影响因子6000+。
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文献和实验Circular RNA circEsyt2 regulates vascular smooth muscle cell remodeling via splicing regulation
