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- xy-4668
- 2025年07月15日
- 科研使用
- Goat，Rabbit，Mouse
- 人，大鼠，小鼠，兔
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 形态：
液态/粉状
- 保存条件：
-20℃保存
- 克隆性：
多克隆
- 标记物：
见说明书
- 适应物种：
人，大鼠，小鼠，兔
- 宿主：
Goat，Rabbit，Mouse
- 应用范围：
科研使用
- 浓度：
1mg/1ml
- 靶点：
来电咨询
Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb提供各种一抗，二抗，单克隆，多克隆抗体以及不同蛋白的各种标记服务、各种纯化服务及载体蛋白连接服务，提供抗体、抗原亲和层析柱装配服务，欢迎来电咨询。
步骤：1. 分离胶和积层胶，制胶板；
注意：灌分离胶时不要加太多。
2. 蛋白变性：准备蛋白样本，Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb加入等体积的2×上样Buffer稀释，置于沸水中煮10min（预染marker煮5min）
3. 加样：每孔加入20～40μl样品
4. 电泳：置于电泳槽中电泳45min，恒定电流90mA(2快板），如为一块板则电流为50 mA。
5. 取出胶板，用切割刀修好胶；
6. 将胶置于转膜液中浸泡；
7. 按顺序放好下列物质：黑面→海绵→滤纸→胶→NC膜→滤纸（用吸管赶去气泡）→海绵；
8. 置于转膜槽中于，黑面对黑面，加上冰块，加入转膜液；
9. 装好电极，于恒定电压100V下，90min；
10. 丽春红染膜；
11. Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb用TBST洗去丽春红；
12. 封闭：加入5％脱脂奶粉＋TBST，常温摇床摇1h；
13. 回收封闭液，加入一抗【一抗用5％BSA＋TBS稀释】；
14. 置于4℃摇床摇过夜；
15. 回收一抗，TBST洗膜，10min，共3次；
16. 加入二抗【二抗用5％脱脂奶粉＋TBS稀释】，常温摇床摇1h；
17. 回收二抗，TBST洗膜，10min，共3次；
18. 将膜置于发光液中浸泡约1min；
19. 将膜铺于曝光盒中，于暗室中曝光，洗胶片。
大规模单克隆抗体的生产目前主要有两种方式，Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb一是腹水制备法，另一种是转瓶培养法。腹水制备法：将杂交瘤细胞株进行体外培养至一定浓度，再将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中，产生腹水，从腹水中纯化单克隆抗体。每只小鼠可以产生3~8 mL腹水，抗体含量可以达到1~10 mg/mL。腹水制备的周期为3~4周。腹水制备法具备成本低、产量高，时间快等优点，是目前主要的大规模抗体生产方式。转瓶培养法：将杂交瘤细胞进行大规模体外培养，从培养基中纯化抗体。抗体含量可以达到20~80 mg/L。转瓶制备法具有抗体品质高、不含小鼠杂蛋白，不含动物病毒等优点。
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文献和实验) is accompanied with or inactivates the GSK activity. However, it is still not conclusive what the role of Tyr phosphorylation (Y216 fro beta, Y279 for alpha) on GSK activity is. One reference is a review paper published in Cell in 2001, you may take a quick
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