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- 2025年07月12日
- 科研使用
- Goat，Rabbit，Mouse
- 人，大鼠，小鼠，兔
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 形态：
液态/粉状
- 保存条件：
-20℃保存
- 克隆性：
多克隆
- 标记物：
见说明书
- 适应物种：
人，大鼠，小鼠，兔
- 宿主：
Goat，Rabbit，Mouse
- 应用范围：
科研使用
- 浓度：
1mg/1ml
- 靶点：
来电咨询
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb提供各种一抗，二抗，单克隆，多克隆抗体以及不同蛋白的各种标记服务、各种纯化服务及载体蛋白连接服务，提供抗体、抗原亲和层析柱装配服务，欢迎来电咨询。
步骤：1. 分离胶和积层胶，制胶板；
注意：灌分离胶时不要加太多。
2. 蛋白变性：准备蛋白样本，Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb加入等体积的2×上样Buffer稀释，置于沸水中煮10min（预染marker煮5min）
3. 加样：每孔加入20～40μl样品
4. 电泳：置于电泳槽中电泳45min，恒定电流90mA(2快板），如为一块板则电流为50 mA。
5. 取出胶板，用切割刀修好胶；
6. 将胶置于转膜液中浸泡；
7. 按顺序放好下列物质：黑面→海绵→滤纸→胶→NC膜→滤纸（用吸管赶去气泡）→海绵；
8. 置于转膜槽中于，黑面对黑面，加上冰块，加入转膜液；
9. 装好电极，于恒定电压100V下，90min；
10. 丽春红染膜；
11. Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb用TBST洗去丽春红；
12. 封闭：加入5％脱脂奶粉＋TBST，常温摇床摇1h；
13. 回收封闭液，加入一抗【一抗用5％BSA＋TBS稀释】；
14. 置于4℃摇床摇过夜；
15. 回收一抗，TBST洗膜，10min，共3次；
16. 加入二抗【二抗用5％脱脂奶粉＋TBS稀释】，常温摇床摇1h；
17. 回收二抗，TBST洗膜，10min，共3次；
18. 将膜置于发光液中浸泡约1min；
19. 将膜铺于曝光盒中，于暗室中曝光，洗胶片。
大规模单克隆抗体的生产目前主要有两种方式，Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb一是腹水制备法，另一种是转瓶培养法。腹水制备法：将杂交瘤细胞株进行体外培养至一定浓度，再将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中，产生腹水，从腹水中纯化单克隆抗体。每只小鼠可以产生3~8 mL腹水，抗体含量可以达到1~10 mg/mL。腹水制备的周期为3~4周。腹水制备法具备成本低、产量高，时间快等优点，是目前主要的大规模抗体生产方式。转瓶培养法：将杂交瘤细胞进行大规模体外培养，从培养基中纯化抗体。抗体含量可以达到20~80 mg/L。转瓶制备法具有抗体品质高、不含小鼠杂蛋白，不含动物病毒等优点。
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文献和实验：使用 Anti-phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。（图 A）使用免疫组化试剂盒M&R HRP/DAB Detection IHC Kit，抗体 1:100 稀释；(图 B) 采用普通免疫组化试剂盒，抗体 1:25 稀释。 图 6 免疫组化实验检测 Erk1/2 表达 注：使用 Anti-Erk1/2 Mouse mAb与p44/42 MAPK （Erk1/2）Rabbit mAb 对正常小鼠心脏组织进行免疫
(Ser473)(193H12)Rabbit mAb，1:300,稀释，二抗是驴抗兔，1：2000，我是实验室的新手，刚呆俩月，受 此挫折，一头雾水，请过来人或者有经验的同学帮忙解答怎样解决，非常感谢！ 碧峤 pAkt有两个位点，Ser473和Thr308，其中Ser473相对容易显色。如果显色失败，可能的原因:1 上样量过少，我们一般都是30μg；2 一抗孵育时间过短，我们一般24h~48h；3 一抗是否工作有待排除 米宝
TBS 和 5% NGS 中封闭样品。市售的含有酪蛋白的封闭溶液与磷酸化的一抗结合后易减弱信号；因此，我们建议不使用含有酪蛋白的封闭剂进行磷酸化特异性抗体的检测。以上针对封闭步骤所提建议均是在以 SignalStain. Boost IHC Detection Reagent 作为检测试剂的情况下提出的。如果选择使用其他检测试剂，我们则建议使用与二抗来源相同的血清进行封闭。抗体：Phospho–Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb #9718样本：石蜡
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