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培养基:MEGM Bullet Kit(Clonetics Corparation CC-3150)+100ng/ml choleratoxin(Sigma C8052)
人正常乳腺上皮细胞.MCF 10A注意事项:
1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(40×,100×,200×各一张)。
3. 将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理,以稳定细胞状态。
4. 预热培养基(含10%胎牛血清,1%双抗)。
5. 若细胞密度较小,无菌操作,去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上,进行传代。
6. 若细胞密度较大,达到80%以上,将细胞传到10cm培养皿培养。
7. 传代时,T25瓶里保留部分细胞,同步培养,直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良好。
我们。
人正常乳腺上皮细胞.MCF 10A原代:
原代细胞的培育是指直接从机体取下细胞、安排和器官后当即进行培育。因而,较为严格地说是指成功传代之前的培育,此刻的细胞坚持原有细胞的根本性质,如果是正常细胞,依然保存二倍体数。但实际上,通常把第一代至第十代以内的培育细胞统称为原代细胞培育。[1]
最常用的原代细胞的培育有安排块培育和涣散细胞培育。
安排块培育是将剪碎的安排块直接移植在培育瓶壁上,参加培育基后进行培育。
涣散细胞培育大致进程为:
将动物安排从机体中取出离散成单个细胞(常用胰蛋白酶),置适宜的培育基中培育,使细胞得以生计、成长和繁衍(注意全部进程无菌)。
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