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BD货号556547 Anne
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Annexin V FITC Apoptosis Kit
100⁺盒
上海睿安生物13611631389
二、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的组份: Product code Description556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit IComponents:556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E556547b Annexin V-FITC (51-65874X)556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E) 三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的操作步骤 : 贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。(1)用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer;(2)细胞收集。悬浮细胞收集:离心5分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后(注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合),于室温2000rpm离心5~10分钟,收集细胞;(3)细胞洗涤:用预冷1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm离心5~10分钟,洗涤细胞;(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞;(5)Annexin V-FITC标记:加入5μL的Annexin V-FITC混匀后,避光,室温孵育15分钟;(6)PI标记:上机前5分钟再加入5μL的PI染色。(7)上机前,补加200μL的1×Binding Buffer。四、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的保存:
4℃保存,两个月内可保持稳定;避免反复冻融。五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的注意事项 :(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。(5)在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,最短可在上机前5分钟再加入PI染色。
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