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- 2025年07月14日
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密封干燥保存
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6个月
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1000
- 供应商：
钰博生物
- 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒产品简介：
1. 在研究细胞时常要研究细胞的不同组份，而研究最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。
分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离
出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gelshift)，footprinting等。
2. 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)
提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方
法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以
用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
3. 本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏
细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽
提试剂抽提得到细胞核蛋白。
4. 本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。 - 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒使用说明：
1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白
抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核
蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很
紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免
用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其
细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)
5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可
以适当延长vortex时间。)
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
8. 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12000-16000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千
万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。)
10. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清
会带来细胞浆蛋白的污染。)
11. 最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高
速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
12. 4℃ 12000-16000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-80℃冻
存。
14. 对于新鲜组织：
A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如
200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成
组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃
匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。
C. 4℃ 1500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上
清时千万不要触及沉淀。)
D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开始
操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋白和
细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒注意事项：
1. 需自备PMSF。 建议在临用前数分钟内加入PMSF使PMSF的最终浓度为1mM。 PMSF(WB0114)可以向我
公司订购。
2. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3. 本试剂盒对于组织样品。可以抽提的组织样品数通常不足100个。使用本试剂盒抽提到的细胞核
蛋白与细胞浆蛋白均可直接用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123/WB0124/ WB0125/
WB0126)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到
样品的蛋白浓度。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 - 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒yb-12473R phospho-Androgen Receptor (Ser94)磷酸化雄激素受体抗体 浓度1mg/ml
yb-12474R phospho-Androgen Receptor (Tyr363)磷酸化雄激素受体抗体 浓度1mg/ml
yb-12475R ANKK1锚定蛋白重复结构域蛋白激酶ANKK1抗体 浓度1mg/ml
yb-12961R phospho-alpha Adducin (Thr445)磷酸化内收蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-12477R Annexin A11膜粘连蛋白11抗体 浓度1mg/ml
yb-12478R Annexin A13膜粘连蛋白13抗体 浓度1mg/ml
yb-12959R phospho-ACTH (Ser168)磷酸化促肾上腺皮质激素ACTH抗体 浓度1mg/ml
yb-12962R phospho-AKT1 (Ser246)磷酸化蛋白激酶AKT1抗体 浓度1mg/ml
yb-15963R phospho-AKT1/3 (Tyr473)磷酸化蛋白激酶B抗体 浓度1mg/ml
yb-15967R phospho-alpha 1 Sodium Potassium ATPase (Tyr260) 磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体 浓度1mg/ml
yb-15968R phospho-alpha Adducin(Ser436)磷酸化内收蛋白a1抗体 浓度1mg/ml
yb-12972R phospho-AMPK alpha 1 (Ser487)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体 浓度1mg/ml
yb-12973R phospho-AMPK alpha 2 (Ser345)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体 浓度1mg/ml
yb-12976R ASAH1酸性神经酰胺酶1抗体 浓度1mg/ml
yb-13357R ADRM1粘附调节分子1抗体 浓度1mg/ml
yb-12488R Aphrodisin气味结合蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-5110R ALDH2乙醛脱氢酶2抗体 浓度1mg/ml
yb-5127R Annexin A10膜粘连蛋白10抗体 浓度1mg/ml
yb-5123R Anterior Gradient 2前梯度同源蛋白2抗体 浓度1mg/ml
yb-5133R ALDH1B1乙醛脱氢酶5抗体 浓度1mg/ml
yb-5139R ALF通用转录因子IIA样因子抗体 浓度1mg/ml
yb-4009R ATG4D自噬相关蛋白4D抗体 浓度1mg/ml
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