M-MLV (H-) Reverse Transcripta

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶产品描述

野生型的M-MuLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA，本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶，即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase，与M-MuLV相比，不仅改善了模板RNA可能被降解情况，且具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。

本品适用于第一链cDNA合成，cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶产品组分

编号

组分

产品编号及规格

11105ES90 (5,000U)

11105ES92 (10,000U)

11105-A

5×Reaction Buffer

250 μl

500 μl

11105-B

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μl)

25 μl

50 μl

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

注意事项

1）为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。

2）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

3）如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构，可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀，65℃变性5min，冰上冷却，短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。

4）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶使用方法

1第一条链cDNA合成（以20μl反应体系为例）

1.1 按照表【1】配制反应体系

表1 cDNA第一条链合成反应体系表

RNase free ddH2O

to 20 μl

5×Reaction Buffer

4 μl

dNTP Mixture (10 mM each)

1 μl

Oligo(dT)18(0.5μg/μl)

or Random hexamer (0.1μg/μl)

or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM)

1 μl

RNase inhibitor (40 U/μl)

0.5 μl

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase

1 μl

模板RNA

Total RNA: 50ng-5μg

mRNA: 5-500ng

1.2 轻轻混匀

若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物，42℃孵育50min。

若使用Random hexamer，25℃孵育10min，42℃孵育50min。

1.3 65℃加热15min失活M-MLV (H-) Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR

建议取1/10～1/5体积（2～4µl）的反转录产物作为PCR模板。

2.1 按照【表2】配制反应体系表

表2 RT-PCR反应体系表

组分

体积

终浓度

cDNA 模板

2μl

依需要调整

Forward Primer (10μM)

1μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

1μl

0.2 μM each

10×Taq Buffer(含Mg2+)

5 μl

1×

2.5mM dNTPs

4μl

0.2 mM

Taq DNA Polymerase

0.5μl

2.5units

ddH2O to final volume

50μl

/

2.2 按下列条件进行PCR反应：
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶yb1753 HSC PCR 人干细胞多能性检测试剂盒 Human Stem Cell Pluripotency Detection Kit 50 reactions
yb1754 ALP 碱性磷酸酶活性测定试剂盒 Alkaline Phosphatase Activity Assay 500 tests
yb1755 ALPr 碱性磷酸酶染色检测（红色） Alkaline Phosphatase Staining Assay (Red) 500 tests
yb1756 PCR 人间质干细胞成脂肪细胞检测试剂盒 Human Mesenchymal Stem Cell Adipogenesis Detection Kit 50 reactions
yb1757 HMSC-C PCR 人间充质干细胞软骨形成检测试剂盒 Human Mesenchymal Stem Cell Chondrogenesis Detection Kit 50 reactions
yb1758 SafraninO 番红O染色试剂盒 Safranin O Staining Kit 100 reactions
yb1759 ABlue 阿利新蓝染色试剂盒 Alcian Blue Staining Kit 100 reactions
yb1760
yb1761
yb1762 hActA-ELISA 人活化素A酶联免疫试剂盒 Human Activin A ELISA Kit 96 tests
yb1763 hANG-ELISA 人双调蛋白酶联免疫试剂盒 Human ANG ELISA Kit 96 tests
yb1764 hBDNF-ELISA 人脑源性神经生长因子酶联免疫试剂盒 Human BDNF ELISA Kit 96 tests
yb1765 hBMP-5-ELISA 人BMP-5酶联免疫试剂盒 Human BMP-5 ELISA Kit 96 tests
yb1766 hBMP-2-ELISA 人BMP-2酶联免疫试剂盒 Human BMP-2 ELISA Kit 96 tests
yb1767 hBMP-4-ELISA 人BMP-4酶联免疫试剂盒 Human BMP-4 ELISA Kit 96 tests
yb1768 hEGF-ELISA 人表皮生长因子酶联免疫试剂盒 Human EGF ELISA Kit 96 tests
yb1769 hEGFR-ELISA 人表皮生长因子受体酶联免疫试剂盒 Human EGFR ELISA Kit 96 tests
yb1770 hFAS-ELISA 人凋亡相关因子酶联免疫试剂盒 Human FAS ELISA Kit 96 tests
yb1771 hFASL-ELISA 人凋亡相关因子配体酶联免疫试剂盒 Human FASL ELISA Kit 96 tests
yb1772 hFGF-9-ELISA 人FGF-9酶联免疫酶联免疫试剂盒 Human FGF-9 ELISA Kit 96 tests
yb1773 hFN-ELISA 人纤维连接蛋白酶联免疫试剂盒 Human Fibronectin ELISA Kit 96 tests