Coelenterazine hcp 腔肠素hcp

Coelenterazine hcp 腔肠素hcp背景描述

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，1）能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。

Coelenterazine hcp 腔肠素hcp

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物（见附录1，腔肠素及其衍生物的特性）。



产品描述

本品为粉末形式供应的腔肠素hcp（Coelenterazine hcp），是天然腔肠素的衍生物之一。腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍，且量子产量高和Ca2+反应速度快。非常适合用于钙离子水平的检测。

产品性质

英文别名（English synonym）

CLZN-hcp

CAS号（CAS NO.）

123437-32-1

分子式（Formula）

C25H25N3O2

分子量（Molecular weight）

399.48 g/mol

溶解性（Solubility）

溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO

外观（Apperance）

黄色至橘色粉末

纯度（Purity）（TLC）

≥95%

结构（Structure）


运输和保存方法

冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体下以避免接触空气。

使用方法

1. 腔肠素hcp工作液的配制

腔肠素hcp溶解特性：腔肠素hcp不溶于水，接触空气，水或者任何氧化试剂变得不稳定。切忌溶于DMSO，因为未知或者未研究的反应发生，引起底物的快速降解和未知降解物生成。目前毒性最低的溶剂是100%乙醇，可配制0.1-1mg/ml溶液，然后加入缓冲液，尽量调整缓冲液pH值低于7.0，因为碱性pH会快速降解底物，有时即刻沉淀腔肠素hcp。

腔肠素hcp保存特性：最好的方法是使用前将冻干粉溶于乙醇溶液，然后稀释到工作缓冲体系。对于体外实验，需要将稀释好的工作液室温放置20-30min，以达到稳定。此时准备好的底物工作液可放置几个小时，仅可能有非常微弱的信号衰减发生（如室温放置3-4h）。不建议腔肠素hcp的乙醇储存液放到-20℃或者更低温度保存，因为其高能量的二氧环丁酮结构即使在低温的情况下也会瞬时降解，导致荧光强度明显变弱。若一定要以储存液的形式短时间保存，-70℃避光保存于塑料管内（溶液中不能含有Ca2+），且保护在惰性气体内。

Coelenterazine hcp 腔肠素hcp注意事项

1） 腔肠素hcp粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，可能造成腔肠素hcp氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Coelenterazine hcp 腔肠素hcpyb1498 rStreptavidin 重组链霉亲和素 "Recombinant Streptavidin
" 1mg
yb1499 rHSA 重组人血清白蛋白 "Recombinant Human Serum Albumin
" 1g
yb1500
yb1501
yb1502
yb1503 ECGS 内皮细胞生长因子 Endothelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1504 SMCGS 平滑肌细胞生长因子 Smooth Muscle Cell Growth Supplement 5 ml
yb1505 SMCGS-sf 平滑肌细胞生长因子（不含血清） Smooth Muscle Cell Growth Supplement 5 ml
yb1506 PGS 周细胞生长因子 Pericyte Growth Supplement 5 ml
yb1507 MenCGS 脑膜细胞生长因子 Meningeal Cell Growth Supplement 5 ml
yb1508 NPrCGS 神经前体细胞生长因子 Neural Precursor Cell Growth Supplement 5 ml
yb1509 NGS 神经元生长因子 Neuronal Growth Supplement 5 ml
yb1510 NPCDS 神经前体细胞分化生长因子 Neural Precursor Cell Differentiation Supplement 5 ml
yb1511 OPCGS 少突胶质前体细胞生长因子 Oligodendrocyte Precursor Cell Growth Supplement 5 ml
yb1512 OGS 少突胶质细胞生长因子 Oligodendrocyte Growth Supplement 5 ml
yb1513 OPCDS 少突胶质前体分化生长因子 Oligodendrocyte Precursor Cell Differentiation Supplement 5 ml
yb1514 SCGS 雪旺细胞生长因子 Schwann Cell Growth Supplement 5 ml
yb1515 AGS 星形细胞生长因子 Astrocyte Growth Supplement 5 ml
yb1516 AGS-a 星形细胞生长因子-动物 Astrocyte Growth Supplement-Animal 5 ml
yb1517 MGS 小胶质细胞生长因子 Microglia Growth Supplement 5 ml
yb1518 MGS 巨噬细胞生长因子 Macrophage Growth Supplement 50 ml
yb1519 KGS 角质细胞生长因子 Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1520 KGS-2 角质细胞生长因子（不含 BPE) BPE-free Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1521 KGS-acf 角质细胞生长因子（不含动物成分） Keratinocyte Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1522 MelGS 黑色素细胞生长因子 Melanocyte Growth Supplement 5 ml