Hieff™ PCR Master Mix (With Dy

Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)产品描述

2×HieffTM PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液，含有Taq DNA Polymerase，dNTP混合物，MgCl2以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。

Mix中加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。体系中含有的保护剂使得Master Mix 4ºC条件下长期放置，或经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。

Hieff™ PCR Master Mix (With Dye) 产品信息

组分编号

产品组分

产品编号/规格

10102ES03(1ml)

10102ES08(5×1ml)

10102-A

2×HieffTM PCR Master Mix (With Dye)

1ml

1ml×5

10102-B

超纯水（PCR Grade）

1ml

1ml×5

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

活性定义
用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物，在74ºC，30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。
稳定性检测：





图1. 2 ×HieffTM PCR Master Mix 分别在-20 ºC放置1年、4 ºC放置3个月、25 ºC放置1个月后，菌落PCR扩增1.2 kb片段。电泳结果显示2 × PCR Master Mix具有非常好的稳定性。
Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)注意事项
1. 操作注意事项
由于Taq DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端最后一个碱基选择C或G；
2.2 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
2.3 引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
2.4 引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
2.5 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
2.6 引物GC含量控制在40%-60%之间；
2.7 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

应用实例
1. 反应体系配制（50μl）：

模板DNA§

optional

引物1（10 μM）

2 μl

引物2（10 μM）

2 μl

2 ×HieffTM PCR Master Mix(With Dye)

25μl

ddH2O

up to 50μl

§ 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。

人基因组DNA

0.1～1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10～100 ng

λDNA

0.5～5 ng

质粒DNA

0.1～10 ng

2. PCR循环反应条件

94℃

5 min（预变性）

35个循环

94℃

30 sec

55℃*

30 sec

72℃

60 sec/kb

72℃

7 min（彻底延伸）

* 退火温度需要根据引物的Tm值调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。
Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)yb-axbz-243 大鼠骨骼肌成肌细胞 L6 规格25毫升/株.
yb-axbz-244 小鼠肺腺癌细胞系 LA795 规格25毫升/株.
yb-axbz-245 鼬肺上皮细胞 MV-1-Lu 规格25毫升/株.
yb-axbz-246 兔晶体上皮细胞永生系 N/N1003A（RLE） 规格25毫升/株.
yb-axbz-247 大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞 RBL-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-248 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞 SH2 规格25毫升/株.
yb-axbz-249 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞 SH3 规格25毫升/株.
yb-axbz-250 仓鼠/小鼠杂交瘤细胞 145-2C11 规格25毫升/株.
yb-axbz-251 小鼠T淋巴细胞 Cl.Ly1+2-/9 规格25毫升/株.
yb-axbz-252 大鼠骨髓瘤细胞 IR983F 规格25毫升/株.
yb-axbz-253 小鼠单核巨噬细胞 J774A.1 规格25毫升/株.
yb-axbz-254 小鼠肾集合管细胞(SV40转化) M-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-255 狗肾细胞隆突型 MDCK superdome 规格25毫升/株.
yb-axbz-256 绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞 MFC-GFP 规格25毫升/株.
yb-axbz-257 小鼠肾足细胞 Mouse podocyte 规格25毫升/株.
yb-axbz-258 小鼠子宫颈癌细胞 U14 规格25毫升/株.
yb-axbz-259 绿色荧光蛋白标记小鼠子宫颈癌细胞 U14-GFP 规格25毫升/株.
yb-axbz-260 小鼠浆细胞瘤 MPC-11 规格25毫升/株.
yb-axbz-261 转PYTL基因小鼠睾丸支持细胞 15P-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-263 小鼠结肠癌细胞 CT26.WT [CT26WT] 规格25毫升/株.
yb-axbz-264 小鼠网织细胞肉瘤 M5076 规格25毫升/株.
yb-axbz-265 小鼠正常肝细胞 NCTC1469 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-266 正常小鼠睾丸Leydig细胞 TM3 规格25毫升/株.
yb-axbz-267 正常小鼠睾丸Leydig细胞 TM4 规格25毫升/株.
yb-axbz-268 615小鼠乳腺癌瘤株 Ca759 规格25毫升/株.
yb-axbz-269 615小鼠乳腺癌瘤株 Ca761 规格25毫升/株.