RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液

RIPA Lysis Buffer (Strong) RIP

A裂解液
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  • 上海钰博
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  • 2025年11月26日
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      密封干燥保存

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      6个月

    • 英文名

      RIPA Lysis Buffer (Strong)

    • 库存

      1000

    • 供应商

      钰博生物

    RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液产品描述

    RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

    RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,并含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。

    RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。

    -20℃保存,一年有效。尽量避免反复冻融,建议分装后使用。

    注意事项

    1)需自备PMSF。

    2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    3)用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(YEASEN CAT NO.20201ES76)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液使用说明:

    (一) 培养细胞样品:

    1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

    2. 贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

    悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

    3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

    (二)组织样品:

    1. 把组织剪切成细小的碎片。

    2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

    3. 按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

    4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

    6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

    RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液yb0877 人结肠直肠腺癌 NCI-H508 [H508]细胞
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    yb0899 人结肠癌细胞,SW1116细胞
    yb0900 人结肠癌细胞,RKO细胞
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    yb0902 人结肠癌细胞,LS174T细胞

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