Coomassie Brilliant Blue G250

Coomassie Brilliant Blue G250 考马斯亮蓝G250产品描述

考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上 “G”为Green 的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。

考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1µg蛋白。R250染色后需要褪色，才能进行蛋白条带的观察。

考马斯亮蓝G250的检测灵敏度虽然较低，但也可替代R250，使用一种快速而简单的方法进行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0时，溶液无色；pH 7.0时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化，溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分子周围具有更偏中性的pH环境。合适条件下，当把胶放在酸化的G250溶液中染色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限是0.5µg。虽然灵敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色节省高达11 h。

G250还可通过“Bradford method”用于蛋白质定量。

Coomassie Brilliant Blue G250 考马斯亮蓝G250产品性质

中文别名（Chinese synonym）

酸性蓝90；考马斯亮蓝G；康美赛蓝G250

英文别名（English synonym）

Acid blue 90 Coomassie Brilliant Blue G

CAS号（CAS NO.）

6104-58-1

分子式（Formula）

C47H48N3NaO7S2

分子量（Molecular weight）

854.02

外观（Appearance）

蓝色至红色结晶粉末

溶解性（Solubility）

微溶于水，最好先溶于甲醇或者乙醇。

结构式（Structure）




运输与保存方法

室温运输和保存即可。

使用方法

1. 染色步骤（考马斯亮蓝G250 for SDS-PAGE 胶）

1） 电泳完毕后用足量超纯水清洗凝胶10-30s 以去除SDS。

注：等电聚焦凝胶需要在20%的三氯乙酸中预固定，并用大量水洗去TCA。

2） 将凝胶于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平摇床上低速摇动30min；

3） 去除固定液，更换0.1%考马斯亮蓝G250染色液（0.1% G250 溶于25%甲醇，5%醋酸）完全覆盖住胶，染色30-60min。

4） 染色结束后超纯水清洗凝胶，2-3次，每次5min。

5） 于30%甲醇脱色直至蛋白条带清晰可见。

2．蛋白质定量

1） Bradford 试剂的配制：溶解50mg 考马斯亮蓝G250于50ml甲醇，添加100ml 85%（w/v）的磷酸。 将 上述酸溶液加入850ml水中，并将染液充分溶解（注：不应将水加入酸溶液）。使用前利用Whatman#1滤纸过滤除去沉淀并于4℃避光储存。

2） 标准检测步骤（检测样品量5-100µg/ml蛋白）

a、 稀释5-8个蛋白标准品（通常是BSA），浓度梯度范围在5-100µg/ml。

b、 稀释待测样品（浓度：5-100µg蛋白/30ul）。加入30µl标准品或待测样品到合适的标记测试管中，并设置两个空白对照管。其中一个加入30µl水为标准曲线空白管，另一个加入蛋白稀释液30µl即可。设置2-3个平行。

c、 向每管中加入1.5 ml Bradford 试剂并混匀。

d、 室温放置至少5min。吸光值会随着时间的推移增大，因此样品在室温下放置不超过1h；

e、 测定OD595。

3） 微量分析步骤（＜50µg/ml 蛋白）：

a、 准备5个标准品溶液（1ml/管），分别包含0,10,20,30,40,50µg/ml BSA;

b、 分别吸取800µl标准液和待测溶液（蛋白浓度＜50µg/ml）于一个洁净干燥的测试管。设置2-3个平行。

c、 向没管中加入200ul 染色试剂并旋涡处理；

d、 以下步骤同标准检测步骤中d-e。

Coomassie Brilliant Blue G250 考马斯亮蓝G250注意事项

1）0.1%考马斯亮蓝G250染色液配置的过程中，需要先用甲醇溶解G250粉末后，再加入醋酸和水，一般情况下不需要滤纸除杂。溶液可在4度存放6个月，若长时间保存出现沉淀，可用滤纸过滤得到澄清液体。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Coomassie Brilliant Blue G250 考马斯亮蓝G250yb0479 人胰腺癌细胞,KP1细胞
yb0480 人胰腺癌细胞,JF-305细胞
yb0481 人胰腺癌细胞,Human panc28细胞
yb0482 人胰腺癌细胞,Human panc1细胞
yb0483 人胰腺癌细胞,Hs766T细胞
yb0484 人胰腺癌细胞,HPAC细胞
yb0485 人胰腺癌细胞,CRL细胞
yb0486 人胰腺癌细胞,CFPAC-1细胞
yb0487 人胰腺癌细胞,CaPan-Ⅱ/Capan-2细胞
yb0488 人胰腺癌细胞,Capan2细胞
yb0489 人胰腺癌 SW1990细胞
yb0490 人胰腺癌 PANC-1细胞
yb0491 人羊膜细胞,WISH细胞,
yb0492 人羊膜细胞,HA细胞
yb0493 人眼脉络黑色素瘤细胞,OCM-1细胞
yb0494 人眼脉络黑色素瘤细胞,MuM－2C细胞
yb0495 人眼脉络黑色素瘤细胞,MuM－2B细胞
yb0496 人眼脉络黑色素瘤细胞,C918细胞
yb0497 人咽鳞癌细胞,FaDu细胞,
yb0498 人血液白血病细胞,TF-1细胞
yb0499 人血管平滑肌 T/G细胞
yb0500 人血管内皮细胞,VE细胞
yb0501 人血管内皮细胞,EC-304细胞
yb0502 人雪旺细胞,HSC细胞
yb0503 人胸腺激酶缺陷性细胞系 143TK细胞
yb0504 人胸膜瘤细胞,SMC-1细胞
yb0505 人星形胶质瘤细胞,U251细胞
yb0506 人小细胞肺癌细胞,NCI-H446细胞,
yb0507 人小细胞肺癌细胞,NCI-H345细胞
yb0508 人小细胞肺癌细胞,LTEP-sm细胞
yb0509 人小细胞肺癌细胞,LTEP-P细胞