Fluo-3, AM(钙离子荧光探针)（2mM）

Fluo-3, AM(钙离子荧光探针)（2mM）产品描述

Fluo-3, AM是一种常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60至100倍，最大激发波长为 506nm，最大发射波长为 526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为 525～530nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

本产品以溶液和粉末形式提供：

货号40703ES50（“*”）以液体形式提供，是Fluo-3,AM 的DMSO溶液，浓度为2mM，供货规格50μl（相当于112μg）。

货号 40703ES50（“**”）、40703ES50和40703ES80均以粉末形式提供，使用时可用高质量无水DMSO配制成2-5mM的储存液分装保存。

Fluo-3, AM(钙离子荧光探针)（2mM）产品性质

中文名称（Chinese Synonym）

钙荧光探针Fluo-3, AM

CAS 号（CAS NO.）

121714-22-5

分子式（Molecular Fomular）

C51H50Cl2N2O23

分子量（Molecular Weight）

1129.85

Ex/Em (nm)

506/526

纯度（Purity）

≥90%(HPLC)

外观（Appearance）

液体

结构式（Structure）



运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。溶液和粉末均于-20℃干燥避光保存，有效期6个月。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）本Fluo-3 AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Fluo-3, AM(钙离子荧光探针)（2mM）试剂准备

1、配制Pluronic F-127母液：100mg Pluronic F-127粉末（Cat No. 60318ES60）中加入0.5ml DMSO，配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不要冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2、Hanks•balanced salt solution（HBSS）

3、HEPES buffer saline：10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4

操作方法

1）用高质量无水DMSO溶解Fluo-3, AM配制成2-5mM的储存液，或将溶液形式的Fluo-3, AM储存液取出于室温回温。

2）向 Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以防止 Fluo-3, AM 在 HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。

【注】：不建议在Pluronic F127中长期保存Fluo-3, AM溶液。

3）用 HBSS稀释 Fluo-3, AM溶液，制备 4µM 的 Fluo-3, AM 工作液。

【注】：推荐该探针加载浓度在4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

4）将 Fluo-3, AM工作液加入细胞，在37℃培养 20 分钟。

5）加入 5 倍体积的含有1%胎牛血清的 HBSS，再继续培养 40分钟。

6）用 HEPES buffer saline 洗涤细胞 3 次，然后用 HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成 1×105 cells/ml的溶液。

7）37℃下培养 10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 506nm，发射波长526nm。

【注】：标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

提交

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